蘆丁的提取與鑒定

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1、實(shí)驗(yàn)三蘆丁的提取分離與鑒定2015/3/20一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握用槐花米提取，精制蘆丁的原理和操作方法。2.根據(jù)黃酮類成分的性質(zhì)，掌握黃酮苷，苷元以及糖部分的鑒定方法。3.熟悉提取過程中防止或減少苷水解的方法。4.通過紫外光譜的測定熟悉用化學(xué)診斷試劑確定黃酮類羥基位置的方法。二.實(shí)驗(yàn)原理蘆丁為雙糖苷，具有較大極性，對熱水和冷水具有較大的溶解差異，故用水對其進(jìn)行提取精制。蘆丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖，鼠李糖，并通過薄層層析，紙層析鑒定。蘆丁及槲皮素還可以通過化學(xué)反應(yīng)及紫外及紅外光譜鑒定。OHOHOHOHHOOHOOO+HH,OH+OOHOHOGlcOH

2、OORhaOH,OH+HC3三．實(shí)驗(yàn)步驟(1)實(shí)驗(yàn)流程（2）化學(xué)檢識檢識反應(yīng)實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象解析Molish反應(yīng)蘆丁，槲皮素分別蘆丁分層上層呈淺Molish反應(yīng)是鑒定用乙醇溶解，加入黃色，下層出現(xiàn)紫糖的反應(yīng)。蘆丁含a-萘酚，濃硫酸紅色環(huán)。槲皮素分有葡萄糖和鼠李層上層為淺黃色，糖，所以出現(xiàn)紫環(huán)下層為無色反應(yīng)，槲皮素沒有糖結(jié)構(gòu)，所以沒反應(yīng)。鹽酸-鎂粉反應(yīng)蘆丁，槲皮素分別蘆丁，槲皮素溶液鹽酸鎂粉反應(yīng)是檢用甲醇溶解，加入都變成紫紅色查是否有黃酮類化鎂粉，濃硫酸合物的最常用方法。蘆丁，槲皮素都含有黃酮結(jié)構(gòu)，所以出現(xiàn)紫紅色。醋酸鎂反應(yīng)蘆丁，槲皮素分別蘆丁，槲皮素溶液蘆丁

3、，槲皮素都含用甲醇溶解，加入都出現(xiàn)熒光有黃酮結(jié)構(gòu)。醋酸鎂三氯化鐵反應(yīng)蘆丁，槲皮素分別蘆丁溶液變成綠色蘆丁，槲皮素都黃用乙醇溶解，加入槲皮素溶液變成深酮類化合物，黃酮三氯化鐵綠色類化合物，5-羥基呈綠色，3，5-二羥基呈深綠色。二氯氧鋯-檸檬酸反蘆丁，槲皮素分別蘆丁溶液加入蘆丁，槲皮素都有應(yīng)用甲醇溶解，加入ZrOCl2后顏色加深，3-OH，5-OH，所以ZrOCl2，再加入檸檬加入檸檬酸后，顏遇ZrOCl2顏色變酸色變淺。深，蘆丁只含5-槲皮素加入ZrOCl2OH，所以加檸檬酸后顏色變深，加入后褪色，槲皮素3-檸檬酸后沒變化。OH，5-OH都有，所以加檸檬酸，

4、不會褪色。（3）紙層析3.2?1.5Rf(a)==0.317?1.53.3?1.5Rf(葡萄糖對照品)==0.337?1.53.9?1.5Rf(b)==0.447?1.53.9?1.5Rf(鼠李糖對照品)==0.447?1.55.1?1.5Rf(蘆丁樣品)==0.657?1.55?1.5Rf(蘆丁對照品)==0.647?1.55.8?1.5Rf(槲皮素樣品)==0.787?1.56.1?1.5Rf(槲皮素對照品)==0.847?1.5因?yàn)镽f(a)≈Rf(葡萄糖對照品)Rf(b)=Rf(鼠李糖對照品)Rf(蘆丁樣品)≈Rf(蘆丁對照品)Rf(槲皮素樣品)≈R

5、f(槲皮素對照品)所以可以認(rèn)為a為葡萄糖，b為鼠李糖。糖試液中含有葡萄糖和鼠李糖。蘆丁樣品中含有蘆丁，槲皮素樣品中含有槲皮素。（4）薄層色譜Rf（A）=0.46Rf（B）=0.40Rf（C）=0.10Rf（D）=0.07因?yàn)镽f（A）≈Rf（B）Rf（C）≈Rf（D）所以可以認(rèn)為B為蘆丁，D為槲皮素。五．實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論因?yàn)榛被椎闹饕瘜W(xué)成分蘆丁含量為12%~16%,假設(shè)實(shí)驗(yàn)批次槐花米蘆丁含量為14%.所以這20g槐花米含2.8g蘆丁。粗制蘆丁的提取率為1.2/2.8=0.43。可以看出提取率較低，可能是我們組用棉花過濾時(shí)，有槐花米顆粒漏下去濾液中，再過濾一

6、遍，導(dǎo)致?lián)p失變大。雖然產(chǎn)率比較少，但做出來的的樣品呈淡黃色，性狀較好。六．思考題1根據(jù)蘆丁的性質(zhì)還可以采用那種方法進(jìn)行提取？試設(shè)計(jì)槐花米中提取蘆丁的另外一種方法，并說明原理?；被?倍水，煮沸，加入石灰乳至PH到8~9，微沸20min,趁熱抽濾濾渣加四倍水煮沸，趁熱抽濾濾液60~70℃加HCl至PH至5攪勻，靜置24h，抽濾，洗沉淀物至中性，干燥蘆丁粗品重結(jié)晶蘆丁純品原理：黃酮苷難溶于酸水，易溶于堿水。2蘆丁及槲皮素的紙層析和聚酰胺薄膜層析的結(jié)果如何？為什么不同？在紙層析中Rf槲皮素>Rf蘆丁，在聚酰胺薄膜層析中Rf槲皮素

7、極性比槲皮素大，所以Rf槲皮素>Rf蘆丁聚酰胺薄膜是吸附色譜，蘆丁極性與流動相極性相近，易向高處展開，所以Rf槲皮素