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1、山東醫(yī)藥2014年第54卷第47期甲狀旁腺素對(duì)新生大鼠心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)及其凋亡的影響張偉兵，張慧，王林，王志鵬。元錦花(1哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院，哈爾濱150001；2哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院)摘要：目的觀察甲狀旁腺素1—34(PTH1—34)對(duì)新生大鼠心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)和凋亡的影響。方法將原代培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞分為對(duì)照組及低、中、高劑量組，對(duì)照組加入PBS緩沖液，低、中、高劑量組分別加人終濃度為0．1、1．0、10．0~moVL的PTH1—34，孵育24h。采用LS~500液體閃爍儀檢測(cè)各組心肌細(xì)胞H一亮氨酸(Leu)摻人量，ELISA法檢測(cè)心房利鈉尿肽(ANP)和
2、Caspase一3，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。結(jié)果與對(duì)照組比較，低劑量組H—Leu摻人量和ANP水平升高，中、高劑量組H—Leu摻入量、ANP水平、Caspase~水平、凋亡率升高(P均<0．05)；與中劑量組比較，高劑量組H—Leu摻入量、ANP水平降低，Caspase一3水平、凋亡率升高(P均<0．05)。結(jié)論低濃度PTH1—34可誘導(dǎo)新生大鼠心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)，較高濃度VI'H1．34還可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡。關(guān)鍵詞：甲狀旁腺素1—34；心肌細(xì)胞；Caspase一3蛋白doi：10．3969／j．issn．1002~66X．2014．47．009中圖分類號(hào)：R542．2文獻(xiàn)
3、標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002~66X(2014)47~031-03心肌肥厚是心臟對(duì)多種病理因素的一種適應(yīng)性酶37℃水浴搖床反復(fù)消化。將收集細(xì)胞懸液過濾反應(yīng)，也是心血管各種并發(fā)癥發(fā)病與病死的獨(dú)立危后，1000r／rain離心10min，取沉淀以10％血清險(xiǎn)因素。多種刺激包括壓力負(fù)荷、血管緊張素．Ⅱ、DMEM重新懸浮，差速貼壁90min去除成纖維細(xì)內(nèi)皮素-1、兒茶酚胺等均可導(dǎo)致心肌肥厚¨“。這胞，未貼壁的細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼{(diào)整細(xì)胞密度后移些刺激因素可能通過影響細(xì)胞內(nèi)的各種信號(hào)活化肥人培養(yǎng)板中，在最初的48h內(nèi)加入終濃度為0．1大相關(guān)基因，導(dǎo)致心肌細(xì)胞增大和凋亡，這些變化是mmol
4、／L5溴脫氧尿核苷抑制成纖維細(xì)胞的生長。心肌肥厚的主要病理變化，也是心肌肥厚向心力衰細(xì)胞在37℃、5％CO：條件下培養(yǎng)3d，換成無血清竭發(fā)生、發(fā)展的主要機(jī)制。甲狀旁腺素(PTH)是由培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)1d，對(duì)照組加入PBS緩沖液，低、甲狀旁腺分泌的激素，是一種重要的中分子尿毒癥中、高劑量組分別加入終濃度為0．1、1．0、10．0毒素J。大量研究’顯示，PTH與尿毒癥患者心~mol／L的PTHI-34，孵育24h。肌肥厚和心力衰竭發(fā)生有關(guān)。既往研究發(fā)現(xiàn)，1．3心肌細(xì)胞H—Leu摻入量及ANP檢測(cè)①H—PTH能在體外誘導(dǎo)新生大鼠心肌細(xì)胞發(fā)生肥大反Leu摻人量：細(xì)胞密度調(diào)整為5×10
5、／L，設(shè)6個(gè)復(fù)應(yīng)，但PTH能否誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡尚不清楚。本研孔，每孔加入37kBqH-Leu。預(yù)冷的PBS洗滌2究觀察了甲狀旁腺素1—34(PTH1—34)對(duì)新生大鼠心次，以2．5g／L胰酶消化40S使細(xì)胞脫落，細(xì)胞懸液肌細(xì)胞肥大反應(yīng)和凋亡的影響，旨在為PTH可能誘加入纖維濾膜中濾去液體，晾干，加入三氯醋酸固定發(fā)心力衰竭的機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。蛋白質(zhì)，無水乙醇脫水。烘干濾膜，放入閃爍瓶中，1材料與方法加閃爍液，采用LS．6500液體閃爍儀測(cè)定。②ANP：1．1主要試劑DMEM干粉、胎牛血清、胰蛋白酶各組細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)后，用預(yù)冷PBS沖洗，超聲破碎(Gibco公司)；甲狀旁腺素
6、1-34(Sigma公司)；H-使細(xì)胞破壞，3000r／rain離心20min，仔細(xì)收集上Leu(北京原子能研究所)；5一溴脫氧尿苷(北京索萊清。按照大鼠ANPELISA試劑盒說明書進(jìn)行操作，寶公司)；心房利鈉尿肽(ANP)ELISA試劑盒(Santa以空白孔調(diào)零，450nm波長依次測(cè)量各孔OD值，根Cruz公司)；Caspase-3ELISA試劑盒o據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算ANP的含量，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。1．2心肌細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組取1～3日齡1．4心肌細(xì)胞凋亡率及Caspase．3檢測(cè)①細(xì)胞凋Wistar乳鼠心尖部分，剪碎至1mm大小，0．25％胰亡率：收集各組細(xì)胞，70％乙醇固定
7、，4℃過夜。加入PI染液，避光37℃孵育30rain。流式細(xì)胞儀(美基金項(xiàng)目：黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(11531153)。國BD公司)采集數(shù)據(jù)進(jìn)行亞二倍體的百分比分析。31山東醫(yī)藥2014年第54卷第47期CellQuest軟件分析每個(gè)樣本10000個(gè)細(xì)胞，結(jié)果用基本機(jī)制是心室的心肌重構(gòu)。心肌細(xì)胞肥大、凋百分比表示。②Caspase一3：收集各組細(xì)胞上清液，亡均是心肌重構(gòu)的特征性改變。其中，心肌細(xì)胞凋3000r／min，離心10min去除顆粒和聚合物，各取亡在心肌肥厚中的重要性Et益受到重視，心肌細(xì)胞50加
