WI-03-28活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)檢驗(yàn)方法.doc

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1、恩施金凰新材料有限公司文件編號WI-03-28版號A.0活菌計(jì)數(shù)檢驗(yàn)方法頁次1/2生效日期2020/01/021．目的規(guī)范及指導(dǎo)生物指示劑（枯草芽孢桿菌菌片）樣本中含有的活菌數(shù)量的測定。2．適用范圍適用于菌片活菌數(shù)確認(rèn)。3．內(nèi)容3.1儀器設(shè)備凈化工作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、刻度吸管(1ml)、PBS(磷酸鹽緩沖液)、瓊脂培養(yǎng)基3.2操作步驟3.2.1每批菌片抽取8個(gè)菌片樣品試驗(yàn)。3.2.2按要求對檢驗(yàn)操作用具進(jìn)行制備及滅菌，以下操作嚴(yán)格按無菌要求進(jìn)行。3.2.3將菌片投入10.0mlPBS無菌試管中，每管一份樣品，然后在手掌上用力振敲80次，將菌洗下形成1:10的菌液

2、，作為①管。3.2.4按稀釋級別（次數(shù)）需要，準(zhǔn)備相應(yīng)數(shù)量的試管，將試管分別排列在試管架上，每管加入9mlPBS，從左到右在試管上標(biāo)上序號。編號123456……稀釋級別10-110-210-310-410-510-6……3.2.5用無菌刻度吸管從①管內(nèi)吸取1ml混勻后的菌液樣本，加至②管內(nèi)。3.2.6將②管依照前面方法在手掌上用力振敲80次混勻，再吸取出1ml加入③管內(nèi)，依照此方法，直至最后一管。3.2.7選擇適稀釋度試管，以吸取其中混合均勻的菌液1ml加入無菌平皿中，每一稀釋度接種3個(gè)平皿，需接種3個(gè)不同稀釋度，平皿加樣前，應(yīng)先按組編號，以免弄混。3.2.8

3、將冷至40℃～45℃的熔化營養(yǎng)基倒入已加入樣液的平皿中，每平皿15～20ml。3.2.9將平皿蓋好立刻輕輕搖動(dòng)均勻，平放于臺(tái)上，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底朝上，置35±2℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。3.3觀察、計(jì)數(shù)和報(bào)告3.3.1每日觀察細(xì)菌生長情況，培養(yǎng)至48小時(shí)計(jì)算最終結(jié)果的菌落數(shù)。3.3.2培養(yǎng)到時(shí)間后，計(jì)數(shù)每個(gè)平板上的菌落數(shù)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏，在記下各平板的菌落總數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)，計(jì)算出原始樣品中每片中的菌落數(shù)，進(jìn)行報(bào)告。恩施金凰新材料有限公司文件編號WI-03-28版號A.0活菌計(jì)數(shù)檢驗(yàn)方法頁次2/2生效日期202

4、0/01/023.3.3到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間，應(yīng)立即計(jì)數(shù)。如果不能立即計(jì)數(shù)，應(yīng)將平板放置于0~4℃，但不得超過24小時(shí)。3.3.4計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)選取菌落數(shù)在30~300之間的平板。3.3.4.1若有兩個(gè)稀釋度均在30~300之間時(shí)，應(yīng)以二者的比值（比值為高稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值除以低稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值）決定，比值小于或等于2時(shí)，以兩個(gè)稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的均值報(bào)告菌數(shù)；比值大于2但不超過5時(shí)，以低稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)；當(dāng)出現(xiàn)比值大于5時(shí)或高稀釋級的菌落數(shù)大于或等于低稀釋級的菌落數(shù)等異常情況時(shí)，應(yīng)查明原因再行檢查。3.3.4.2

5、若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30，則取最低稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。3.3.4.3若所有稀釋度的平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。3.3.5若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30~300之間，其中一部分小于30或大于300時(shí)，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。3.3.6若陰性對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。3.3.7菌落總數(shù)的報(bào)告以10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。3.3.8菌片活菌數(shù)結(jié)果以cfu/片為單位報(bào)告。編制：日期：審核：日期：批準(zhǔn)：日期：