急性、慢性和亞慢性毒性實(shí)驗(yàn).doc

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1、急性毒性試驗(yàn)（一）經(jīng)典的急性致死性毒性試驗(yàn)通過(guò)試驗(yàn)得到化合物引起動(dòng)物死亡的劑量—反應(yīng)關(guān)系并求得LD50（LC50）1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是小鼠或大鼠。一般受試動(dòng)物應(yīng)是雌、雄各半；若雌、雄動(dòng)物對(duì)待測(cè)化學(xué)物毒性的敏感程度有明差異，則應(yīng)分別求出各自的LD50；如果試驗(yàn)是為畸形試驗(yàn)做劑量準(zhǔn)備，也可僅做雌性動(dòng)物的LD50試驗(yàn)。小動(dòng)物每組10只，狗等大動(dòng)物可每組6只。2、染毒劑量設(shè)計(jì)首先要了解化學(xué)毒物的結(jié)構(gòu)式、分子量、常溫常壓下的狀態(tài)、純度、雜質(zhì)成分與含量、溶解度、揮發(fā)度、PH等理化性質(zhì)。對(duì)于新的受試化學(xué)物，找出與受試

2、化學(xué)毒物結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)近似的化學(xué)物的毒性資料，并以文獻(xiàn)資料中相同的動(dòng)物種系和相同接觸途徑所測(cè)得的LD50(LC50)值作為受試化學(xué)物的預(yù)期毒性中值，先用少量動(dòng)物，以較大的劑量間隔（一般按幾何級(jí)數(shù)）染毒，找出找出10%~90%（或0％~100％）的致死劑量范圍，然后在這個(gè)劑量范圍內(nèi)設(shè)幾個(gè)劑量組。改良寇氏法最好設(shè)5個(gè)劑量組，每組10只動(dòng)物，雌雄各半，劑量組要求以等比級(jí)數(shù)設(shè)置。根據(jù)以下公式計(jì)算出劑量分組：i=(lgLD90-lgLD10)／(n-1)或：i=(lgLD100-lgLD0)／(n-1)式中i為組距(相鄰

3、的兩個(gè)劑量組對(duì)數(shù)劑量之差)；n為設(shè)計(jì)的劑量組數(shù)。有的毒性較小，此時(shí)可不再求其LD50，而應(yīng)進(jìn)行限量試驗(yàn)。在用大鼠或小鼠進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，一般用20只動(dòng)物，雌雄各半。單次染毒劑量一般限定為5g/kg（體重），對(duì)于食品毒理學(xué)試驗(yàn)，限量要求為15g/kg（體重）。如果實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無(wú)死亡或僅有個(gè)別動(dòng)物死亡（死亡率低于50%），則可得出LD50大于限量的結(jié)論。3、觀察染毒后一般要求觀察14天，依據(jù)14天內(nèi)動(dòng)物的總死亡情況計(jì)算LD50。在實(shí)際工作中，依據(jù)受試物有關(guān)測(cè)試規(guī)程要求確定觀察期的長(zhǎng)短。觀察內(nèi)容包括：（1）動(dòng)物死亡情況：包括動(dòng)

4、物死亡數(shù)及各自的死亡時(shí)間。（2）動(dòng)物體重：于染毒前、染毒后每周和死亡時(shí)測(cè)定體重。（3）中毒反應(yīng)癥狀：臨床觀察每天至少一次，觀察皮膚、被毛、眼睛和粘膜改變，呼吸、循環(huán)、自主和中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及四肢活動(dòng)和行為方式的變化等，特別要注意有無(wú)震顫、驚厥、腹瀉、嗜睡等現(xiàn)象。神經(jīng)毒性：驚厥、共濟(jì)失調(diào)和死亡。植物神經(jīng)興奮：腹瀉或豎毛。（4）病理學(xué)檢查：解剖進(jìn)行尸檢，觀察各器官有無(wú)改變，對(duì)肉眼觀察有變化的臟器需進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。4、LD50計(jì)算（1）霍恩氏法（2）簡(jiǎn)化寇氏法M=X–i(Σp–0.5)式中:m—logLD50,X—

5、最高劑量組劑量對(duì)數(shù)值,p—死亡率(用小數(shù)表示)，Σp—死亡率總和,i—相鄰兩組劑量對(duì)數(shù)之差。（3）直接回歸法：死亡頻率呈正態(tài)分布，則變化曲線為典型的“鐘罩”型；死亡頻率化為累積死亡頻率，反應(yīng)曲線呈S形；累積死亡頻率化為概率單位時(shí)，反應(yīng)曲線呈直線。（二）急性毒性試驗(yàn)的其他方法1.固定計(jì)量法2.急性毒性分級(jí)法3.上、下移動(dòng)法亞慢性毒性和慢性毒性的評(píng)價(jià)方法1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物要求選拔兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，一種為嚙齒類(lèi)，首選是大鼠，另一種為非嚙齒類(lèi)，首選是狗。亞慢性毒性試驗(yàn)一般每個(gè)劑量組20只大鼠，或每組4~6只狗。慢性毒性試驗(yàn)每組4

6、0只大鼠，狗每組8只或以上。2、染毒途徑常用的染毒途徑是經(jīng)胃腸道、經(jīng)呼吸道和經(jīng)皮膚染毒。3、染毒期限工業(yè)毒理學(xué)——3－6個(gè)月食品毒理學(xué)——6個(gè)月－1年環(huán)境毒理學(xué)——6個(gè)月－1年致癌試驗(yàn)——接近或等于動(dòng)物的預(yù)期壽命4、劑量分組（1）亞慢性毒性的劑量選擇：陰性對(duì)照組，低劑量組，中劑量組，高劑量組急性毒性的閾劑量：1/20~1/5LD50組距：3~10倍，最低不小于2倍（2）慢性毒性的劑量選擇陰性對(duì)照組，低劑量組，中劑量組，高劑量組亞慢性閾劑量：1/50~1/5LD50組距：2~5倍，最低不小于2倍5、觀察指標(biāo)（1）

7、中毒癥狀（行為和外觀）（2）體重：每周稱(chēng)量一次（3）食物利用率（試驗(yàn)動(dòng)物每食入100g飼料所增長(zhǎng)的體重克數(shù)）（4）實(shí)驗(yàn)室檢查1）血液學(xué)檢查2）尿液檢查3）血液生化學(xué)檢查（5）病理及病理組織學(xué)檢查對(duì)瀕死動(dòng)物進(jìn)行解剖。試驗(yàn)結(jié)束及恢復(fù)期結(jié)束時(shí)，活殺實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。1）系統(tǒng)解剖：消化道、肺、肝、腎、淋巴腺、眼、皮膚等，記錄有無(wú)肉眼可見(jiàn)的異常變化。2）臟器系數(shù)：是指某個(gè)臟器質(zhì)量與體重的比值，又稱(chēng)臟體比值。常以100g體重或1g體重計(jì)。需稱(chēng)量臟器濕重并計(jì)算其臟器系數(shù)。3）組織病理學(xué)檢查（6）特異性指標(biāo)6、結(jié)果分析：選擇適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)

8、學(xué)方法進(jìn)行各劑量組與陰性對(duì)照組的比較。