血清學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)課件.ppt

《血清學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)課件.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、概述定義：免疫學(xué)技術(shù)是根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合原理建立的各種檢測(cè)、分析技術(shù)的總稱分類：體外免疫檢測(cè)技術(shù)：常以免疫血清作為抗體的來(lái)源，故又稱為血清學(xué)試驗(yàn)細(xì)胞免疫技術(shù)：用于檢測(cè)和研究集體的細(xì)胞免疫功能與狀態(tài)免疫制備技術(shù)：如抗體制備、純化、標(biāo)記技術(shù)等血清學(xué)試驗(yàn)類型凝聚性試驗(yàn)：凝集試驗(yàn)，沉淀試驗(yàn)標(biāo)記抗體技術(shù)：熒光、酶、放射性同位素標(biāo)記技術(shù)等有補(bǔ)體參與的試驗(yàn)：補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等中和試驗(yàn)：病毒中和試驗(yàn)等免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)免疫傳感器技術(shù)血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)特異性與交叉性:抗原抗體結(jié)合的特異性是抗原分析和疾病診斷的基礎(chǔ)；但不同微生物的部分共同抗原或不同抗原的相同表位可出現(xiàn)交叉反應(yīng)，后

2、者是區(qū)分血清型或亞型重要依據(jù)結(jié)合比例:抗原抗體結(jié)合在比例適當(dāng)時(shí)才出現(xiàn)明顯可見反應(yīng),抗原或抗體過多可抑制可見反應(yīng),稱為帶現(xiàn)象可逆性:抗原抗體結(jié)合力與非共價(jià)鍵性質(zhì)、數(shù)量和距離有關(guān),形成的復(fù)合物可以解離,離解常數(shù)(K)反映抗體與抗原之間的親合力,高親合力結(jié)合不易解離反應(yīng)的階段性:特異結(jié)合迅速(幾秒-幾分鐘),可見反應(yīng)階段較長(zhǎng)在凝集試驗(yàn)（顆粒性抗原）中，常因抗體過剩出現(xiàn)前帶現(xiàn)象，故需固定抗原稀釋抗體；而在沉淀試驗(yàn)（可溶性抗原）中，可因抗原過剩出現(xiàn)后帶現(xiàn)象，故需稀釋抗原影響血清學(xué)反應(yīng)的因素抗體:包括抗體動(dòng)物來(lái)源、濃度(效價(jià))、親和性等抗原:包括理化特性(可溶性，顆粒

3、性)和抗原表位數(shù)目及種類電解質(zhì):無(wú)電解質(zhì)存在不出現(xiàn)可見反應(yīng)(沉淀或凝集),一般用生理鹽水作為抗體和抗原稀釋液,有時(shí)需特殊電解質(zhì),但鹽濃度過高會(huì)出現(xiàn)非特異性蛋白沉淀(鹽析)酸堿度:反應(yīng)一般在pH6-9范圍內(nèi)進(jìn)行溫度:一般在37℃或室溫進(jìn)行,較低溫度(如4℃)出現(xiàn)可見反應(yīng)慢,但特異性強(qiáng),溫度過高會(huì)使已結(jié)合復(fù)合物解離時(shí)間:出現(xiàn)可見反應(yīng)需要一定時(shí)間,應(yīng)在一定時(shí)間內(nèi)觀察結(jié)果或終止反應(yīng)血清學(xué)試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)，敏感性高檢測(cè)樣品用量少，預(yù)處理較簡(jiǎn)單試驗(yàn)方法多，可擇優(yōu)選用方法簡(jiǎn)易、快速可用于抗原或抗體的定性、定量、定位檢測(cè)血清學(xué)試驗(yàn)的應(yīng)用抗原抗體定性檢測(cè):疾病診斷血型鑒定

4、病原微生物分型鑒定抗原抗體的定量檢測(cè):抗原或抗體效價(jià)測(cè)定免疫效果跟蹤檢測(cè)流行病學(xué)調(diào)查其它生物活性物質(zhì)定量分析抗原定位檢測(cè):借助光學(xué)和電子顯微鏡,在細(xì)胞和亞細(xì)胞水平研究病原微生物及其表達(dá)產(chǎn)物與宿主細(xì)胞的關(guān)系凝聚性試驗(yàn)定義：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，在電解質(zhì)存在下相互凝聚成肉眼可見的凝聚物或沉淀物分類凝集試驗(yàn)：細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原或與顆粒性載體（紅細(xì)胞、乳膠等）結(jié)合的可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊沉淀試驗(yàn)：可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下形成肉眼可見的沉淀物凝集試驗(yàn)分類凝集性試驗(yàn)直接凝集性試驗(yàn)間接凝集性試驗(yàn)玻片凝

5、集性試驗(yàn)試管凝集性試驗(yàn)生長(zhǎng)凝集性試驗(yàn)正向間接凝集性試驗(yàn)反向間接凝集性試驗(yàn)協(xié)同凝集性試驗(yàn)間接凝集抑制試驗(yàn)抗球蛋白試驗(yàn)直接法間接法玻片凝集試驗(yàn)屬于直接凝集和定性試驗(yàn)可用于未知(待測(cè))抗原或抗體檢測(cè)快速簡(jiǎn)便，1-3分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，出現(xiàn)凝集顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)主要用于細(xì)菌分型鑒定、疾病診斷（如布氏桿菌和雞白痢檢疫)和血型鑒定已知抗原陽(yáng)性抗體對(duì)照陰性抗體對(duì)照待測(cè)抗體(陽(yáng)性)待測(cè)抗體(陰性)試管凝集試驗(yàn)多用已知抗原進(jìn)行血清抗體的定性和定量（效價(jià)或滴度）檢測(cè)，可用于疾病診斷和流行病學(xué)調(diào)查常用生理鹽水將待測(cè)血清作倍比稀釋，與等量抗原混合，反應(yīng)溫度和時(shí)間視抗原種類決定判斷標(biāo)準(zhǔn):+

6、+++(100%凝集),+++(75%凝集),++(50%凝集),+(25%凝集),-(不凝集),出現(xiàn)50%以上凝集的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清的凝集價(jià)(滴度)注意陽(yáng)性和陰性對(duì)照,適當(dāng)稀釋待檢血清以避免前帶現(xiàn)象，有些細(xì)菌（如R型細(xì)菌）懸液不穩(wěn)定，易出現(xiàn)自凝現(xiàn)象根據(jù)凝集反應(yīng)原理可制備單因子血清間接凝集試驗(yàn)定義：將可溶性抗原或抗體吸附在免疫無(wú)關(guān)的顆粒載體上，然后與相應(yīng)抗體或抗原進(jìn)行的凝集反應(yīng)常用載體：紅血球(間接血凝試驗(yàn))和乳膠(乳膠凝集試驗(yàn))等，將可溶性抗原吸附在顆粒載體表面的過程稱為致敏分類：正向間接凝集試驗(yàn)：將抗原吸附載體檢測(cè)抗體反向間接凝集試驗(yàn)：將抗體吸

7、附載體檢測(cè)抗原一般在微量反應(yīng)板上進(jìn)行可用于抗原或抗體的效價(jià)測(cè)定，具有簡(jiǎn)單、方便和較準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)協(xié)同凝集試驗(yàn)葡萄球菌A蛋白(SPA)是大多數(shù)金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁上的一種蛋白質(zhì)SPA能與人和動(dòng)物(豬、犬、兔、猴、豚鼠)IgGFc片段非特異結(jié)合與抗體結(jié)合的SPA菌體稱為致敏菌體,可與抗原(細(xì)菌、病毒、毒素等)發(fā)生快速凝集,稱為協(xié)同凝集試驗(yàn)主要用于傳染病的快速診斷,SPA菌體還可用于IgG純化葡萄球菌抗體抗原抗球蛋白(Coombs)試驗(yàn)本質(zhì)：間接凝集試驗(yàn)原理：不完全抗體(單價(jià)抗體)與顆?？乖Y(jié)合不出現(xiàn)可見凝集反應(yīng)，用單價(jià)抗體免疫動(dòng)物,將獲得的抗抗體與結(jié)合有單價(jià)抗體的

8、顆粒載體混合，出現(xiàn)可見的凝集反應(yīng)應(yīng)用：初生動(dòng)物自身免疫溶血性貧血診