酒石酸法茶多酚含量測定報告.docx

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1、茶多酚的含量測定實驗組員：趙龍飛趙奇慧劉芳陳小麗一、實驗原理茶多酚能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。對熱、酸較穩(wěn)定，在堿性條件下易氧化變質。酒石酸鐵能與茶多酚生成紫褐色絡合物，絡合物溶液顏色的深淺與茶多酚的含量成正比，絡合物在540nm處有最佳吸收。因此可以用比色方法測定。二、儀器與試劑儀器：分光光度計、天平、1ml移液槍、100ml容量瓶*6、100ml量筒、100ml燒杯*310mlEP管試劑：(1)FeSO4?7H2O1.000g，含4個結晶水的酒石酸鉀鈉5.000g(2)Na2HPO4?12H2O6.02g，NaH2PO4?2H2O0.50g(3)兒

2、茶素標準品10mg三、操作步驟（1）酒石酸鉀鐵溶液：稱取FeSO4?7H2O0.100g，含4個結晶水的酒石酸鉀鈉0.500g，加蒸餾水溶解后，用蒸餾水稀釋至100mL。（2）pH7.5的磷酸緩沖液：6.020gNa2HPO4?12H2O，0.500gNaH2PO4?2H2O，加蒸餾水溶解后，用蒸餾水稀釋至100mL。(3)兒茶素標準液：稱取10mg兒茶素，用蒸餾水定容至10ml，濃度為1000μg/ml。分別稀釋到200、400、600、800μg/ml，得5個濃度標準品溶液。(4)標準曲線：分別吸取1ml標準液，磷酸緩沖液3ml，酒石酸鉀鐵1ml混勻，3000轉離心10

3、min。吸取上清液3ml加入玻璃比色皿，用分光光度計測定540nm處的OD值三次求平均值，并繪制濃度-OD標準曲線。以蒸餾水代替標準品溶液加入同樣的試劑作空白對照。(5)取提取物10mg，用蒸餾水定容至10ml。取1ml，按上述同樣方法測定540nm處的OD值3次求平均值。以蒸餾水代替樣品溶液加入同樣的試劑作空白對照。四、計算茶多酚含量W=C/1000×100%C：所測吸光度帶入標準曲線得到樣品中茶多酚濃度μg/ml1000：樣品濃度μg/ml四、實驗結果樣品吸光度濃度含量（%）123平均有機溶劑萃取法0.450.4490.450.402.40.26%金屬離子沉淀法0.44

4、90.4490.4490.449402.0701540.21%打孔樹脂30%醇洗脫0.5250.5260.5250.466.46.62%打孔樹脂50%醇洗脫0.3490.3490.3480.317.31.78%打孔樹脂80%醇洗脫0.1110.1110.1110.111118.0318511.80%五、實驗分析由實驗結果看出，30%的乙醇提取大孔樹脂法提取的茶多酚的含量是最高的，而其余的溶劑提取法、金屬離子沉淀法，都相對較低。本實驗數據不能代表各個提取分離方法的絕對優(yōu)略，要視各組在實驗過程中的實際操作是否規(guī)準確。實驗中存在以下問題：1、標準品溶液濃度過低，吸光值存在負數，儀

5、器不夠精密，無法準確測出對應的OD值。最后修改方案，濃度提高了20倍。2、樣品測定時，同樣濃度，吸光度卻高于標準品，也就是含量超過100%。經過各個環(huán)節(jié)問題排除后，懷疑是標準品含量過低。最后重復實驗時發(fā)現加入反應物會有很多不溶的褐色絮狀物，經過離心后再測OD值，數據顯示合理。