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1、茶多酚的含量測定高錳酸鉀直接滴定法目的：掌握高錳酸鉀直接滴定法測定茶葉中茶多酚含量的原理及操作原理茶葉中茶多酚易溶于熱水，在用靛紅作指示劑的情況下，樣液中能被高錳酸鉀氧化的物質基本上都屬于茶多酚物質。根據消耗1mL0.318g/mL的高錳酸鉀相當于5.82mg茶多酚的換算系數，可計算茶多酚的含量。儀器與試劑儀器：分析天平、電動磁力攪拌器、電熱水浴鍋、500mL白瓷皿。試劑：1、0.1%靛紅溶液：稱取靛紅1g加入少量水攪勻后，再慢慢加入相對密度為1.84的濃硫酸50mL，冷卻后用蒸餾水定容至1000mL，如果靛紅不純，可下法磺
2、化處理是：稱取靛紅1g，加濃硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加熱磺化4~6h，用蒸餾水定容至1000mL，過濾后貯于棕色瓶中。2、0.630%草酸溶液：準確稱取草酸6.3034g，用蒸餾水溶解后定容至1000mL。3、高錳酸鉀標準溶液：稱取AR的高錳酸鉀1.27g，用蒸餾水溶解后定容至1000mL。準確吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml錐形瓶中（平行3份），加入蒸餾水50mL，再加入相對密度為1.84的濃硫酸10mL，搖勻，在70~80℃水浴中保溫5分鐘，取出后用高錳酸鉀進行滴定。開始慢滴，待紅色消失后再滴第
3、二滴，以后可逐漸加快，邊滴邊搖，待溶液出現淡紅色保持1分鐘不變即為終點。計算高錳酸鉀溶液的百分比濃度。測定步驟1、供測試液的準備：準確稱取茶葉磨碎樣品1g，放在250mL錐形瓶中，加入沸蒸餾水80mL，在沸水浴中浸提30分鐘，然后抽濾、洗滌，濾液倒入100mL容量瓶中，冷至室溫，最后用蒸餾水定容至100mL，搖勻。2、測定：取200ml蒸餾水放入白瓷皿中，加入0.1%靛紅溶液5mL，再加入供測試液5mL，開動磁力攪拌器，用已標定的高錳酸鉀溶液邊攪拌邊滴定，滴定速度以1滴/s為宜，接近終點時應慢滴。直到溶液由深藍色轉變?yōu)榱咙S色
4、為止，記下消耗的高錳酸鉀毫升數。同時做空白測定。五、結果計算式中：X—茶多酚的含量，%，B—空白消耗的高錳酸鉀毫升數，mLA—樣品消耗的高錳酸鉀毫升數，mLω--高錳酸鉀的濃度，%，m—樣品的質量g，V1—測定用供測試液的體積，mL，V2--供測試液的體積，mL酒石酸鐵比色法原理：茶葉中多酚類物質占茶嫩梢干重的20％～35％，由約30種以上的酚類物質所組成，通稱茶多酚。按其化學結構分為四類：（1）兒茶素類，屬黃烷醇類；（2）黃酮及黃酮醇類；（3）花白素及花青素，即羥基-［4］-黃烷醇及其鉀鹽；（4）醋酸及縮酚酸類。其中以黃烷
5、醇類化合物最重要（占多酚的80％左右）。純兒茶素一般為白色無定形粉末，在空氣中極易氧化成棕色物，能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有機溶劑中。茶多酚能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。對熱、酸較穩(wěn)定，2%的溶液加熱至120℃并保持30min，無明顯變化。在堿性條件下易氧化變質。酒石酸鐵能與茶多酚生成紫褐色絡合物，絡合物溶液顏色的深淺與茶多酚的含量成正比。因此可以用比色方法測定。該法可避免高錳酸鉀滴定法所產生的人為視覺誤差。茶多酚的測定方法有高錳酸鉀直接滴定法和酒石酸鐵比色法，由于高錳酸鉀直接滴定法操作比較復
6、雜，且靠肉眼觀察顏色判斷終點，如果樣品溶液顏色較深時，可能影響測定結果。本實驗將應用酒石酸鐵比色法測定茶多酚的含量。儀器與試劑儀器：分光光度計試劑：（1）酒石酸鐵溶液：稱取FeSO4·7H2O1.000g，含4個結晶水的酒石酸鉀鈉5.000g，加蒸餾水溶解后，用蒸餾水稀釋至1000mL（2）pH7.5的磷酸緩沖液：60.2gNa2HPO4·12H2O，5.00gNaH2PO4·2H2O，加蒸餾水溶解后．用蒸餾水稀釋至1000mL．步驟（l）樣品溶液的制備方法：準確稱取茶葉磨碎樣品1g于200mL三角燒瓶中，加入沸水80mL，
7、在沸水浴中浸提30min，然后過濾、洗滌，濾液倒人100mL容量瓶中，冷至室溫，最后用蒸餾水定容至刻度，搖勻，備用。搖勻，再加入pH7.5磷酸緩沖液稀釋至刻度。以蒸餾水代替樣品溶液加入同樣的試劑作空白。選擇540nm波長和1cm的比色杯測定吸光度。計算式中：ω—茶多酚的含量，%，A—樣品溶液的吸光度值，T—樣品溶液的總體積，mLV—測定用樣品溶液的量，mL，m—樣品質量，g3.913—用1cm比色杯，當吸光度為1.0時，試液中茶多酚的濃度為3.913mg/mL說明及注意事項1、、磷酸鹽緩沖液在常溫下容易生長霉菌，放冰箱中保存
8、或臨用時現配。2、樣品溶液制備中的注意事項：（1）較透明的樣液，如果味茶飲料，將樣液充分搖勻后，直接取樣測定（2）較渾濁的樣液，如果汁茶飲料、奶茶飲料等，稱取充分混勻的樣液25mL于50mL容量瓶中，加95%的乙醇15mL充分混勻，放置15min，用水定容至刻度，過濾。（3）含有碳酸氣的樣
