梅毒螺旋體抗體測(cè)定SOP.docx

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1、梅毒螺旋體抗體測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）【目的】指導(dǎo)免疫項(xiàng)目梅毒螺旋體抗體的測(cè)定?！具m用儀器】酶標(biāo)儀ST-36O、洗板機(jī)ST-36W等。【該SOP變動(dòng)程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專(zhuān)業(yè)主管、科主任?！痉椒ㄔ怼縀LISA法：用HTP特異性抗原包被酶聯(lián)板，待檢血清中的抗TP抗體與包被抗原反應(yīng)，再與酶標(biāo)IgG結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加底物（TMB）顯色，在酶標(biāo)儀上測(cè)定后根據(jù)OD值判定有無(wú)TP抗體的存在?！緲?biāo)本要求】種類(lèi)：血清、血漿?！驹噭吭?/p>

2、劑盒：樣品稀釋液、陰性和陽(yáng)性對(duì)照、濃縮洗液、酶標(biāo)抗體、底物液A、底物液B、終止液。保存條件及有效期：2--8℃儲(chǔ)存。自生產(chǎn)日期起，有效期半年。【質(zhì)控品】試劑盒中的陰性和陽(yáng)性對(duì)照、省臨檢中心下發(fā)的，依說(shuō)明書(shū)4–8℃冷藏?！静僮鞑襟E】1.加樣：每次試驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照1孔；陰性對(duì)照3孔，陽(yáng)性對(duì)照2孔，分別加入HCV陰、陽(yáng)性對(duì)照10微升。除空白孔外，其余孔加入50微升樣本。2.溫育：振蕩混勻，蓋上封板膜，置37±1℃溫育60分鐘。3.洗滌：用洗板機(jī)洗板，重復(fù)洗5次后拍干。4.加酶:空白對(duì)照孔不加酶標(biāo)記物，其余孔加入酶標(biāo)記

3、物100微升。5.溫育：振蕩混勻，蓋上封板膜，置37±1℃溫育30分鐘。6洗滌：用洗板機(jī)洗板，重復(fù)洗5次后拍干。7.顯色：每孔加入底物緩沖液50微升，再加入底物液50微升，振蕩混勻，蓋上封板膜，置37±1℃溫育30分鐘。8.終止：每孔加入終止液50微升，混勻。9.用酶標(biāo)儀讀值，零置酶標(biāo)儀450nm或雙波長(zhǎng)450nm/630nm下測(cè)定OD值。結(jié)果判定1.陰、陽(yáng)性對(duì)照和被檢樣品的OD值減去空白對(duì)照OD值即為計(jì)算值。2.試劑空白需<0.08，陰性對(duì)照孔值≤0.120，陽(yáng)性對(duì)照孔值≥0.300。3．臨界值（cutof

4、f值）的設(shè)定：cutoff值=0.100+陰性對(duì)照OD均值4．被檢樣品的OD值>=臨界值應(yīng)判為HCV抗體陽(yáng)性反應(yīng)，<臨界值為陰性反應(yīng)。注意事項(xiàng)1．各步加液均應(yīng)使用加液器并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免實(shí)驗(yàn)誤差。2．封口膠只限一次性使用，以避免交叉污染。3．洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)洗液，防止因洗滌不充分造成非特異性反應(yīng)。4．HCV抗體試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。5．微孔條從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后再打開(kāi)密封袋，未用完者須放入有干燥劑的密封袋中保存。6．不同批試劑不能混用。7．所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳

5、染物處理。8．請(qǐng)嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。詳見(jiàn)《珠海麗珠試劑有限公司的試劑盒說(shuō)明書(shū)》