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1、鄂爾多斯市檢驗科免疫室作業(yè)指導書文件編號：EEDSZXY-3-MY-33版本/修訂號:A/O生效日期：20090401主題內容梅毒螺旋體抗體膠體金法測定編制人：牛兵審核人：段寶生第125頁共135頁梅毒螺旋體抗體膠體金法測定1【目的】定性檢測血清或血漿中是否含有梅毒抗體2【該SOP變動程序】本標準操作程序的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并經下述人員批準：專業(yè)主管，科主任。3原理梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（膠體金法）采用高度特異性的抗體抗原反應及免疫層析分析技術來定性檢測血清/血漿中是否含有梅毒抗體，試劑盒含有被事先固定于膜
2、上測試區(qū)（T）的重組特異性梅毒抗原和質控區(qū)（C）的相應抗體。測試時，血漿/血清標本滴入試劑盒加樣孔（S）內，血標本中的梅毒抗體與預包被在膜上的膠體金結合物反應。然后，混合物隨之在毛細效應下向上層析，在測試區(qū)（T）與固定在膜上的重組特異性梅毒抗原反應。如果血清中含有抗梅毒抗體，在測試區(qū)內（T）會出現(xiàn)一條紫紅色條帶，表明時陽性結果。如果在測試區(qū)內（T）沒有出現(xiàn)紫紅色條帶，則血標本中不含有抗梅毒抗體，表明是陰性結果。無論抗梅毒抗體是否存在于血標本中，混合物都會繼續(xù)向上層析至質控區(qū)（C），質控區(qū)的相應抗體與膠體金結合物反應出現(xiàn)一條紫紅色條帶
3、。質控區(qū)內（C）所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑的內控標準。4標本采集與處理：4.1受檢者準備：4.1.1受檢者的狀態(tài)：a.不可變的生物因素：年齡，性別，生活環(huán)境遺傳；b.可變的生物因素：A）情緒：原則上患者應在平靜，休息的狀態(tài)下以晨起空腹時采集標本，患者對采集標本時的恐懼、緊張會造成標本采集的失敗。B）運動：受檢者應處于平靜狀態(tài)下采集標本，可減少由于運動帶來的影響。C）生理節(jié)律變化：晝夜的生理變化可能使測定結果不恒定，晨起固定時間空腹血盡可能減少晝夜節(jié)律帶來的影響。4.2采取標本時：A）體位：除非是臥
4、床的病人，一般采血時取坐位。鄂爾多斯市檢驗科免疫室作業(yè)指導書文件編號：EEDSZXY-3-MY-33版本/修訂號:A/O生效日期：20090401主題內容梅毒螺旋體抗體膠體金法測定編制人：牛兵審核人：段寶生第126頁共135頁B）止血帶：一般從肘靜脈采血使用止血帶的時間不宜超過1min，穿刺成功后立即松開止血帶，靜脈阻滯也可影響。4.3受檢者的飲食：餐后采集的標本，易發(fā)現(xiàn)乳糜狀，影響檢驗測定的正確性，故應囑受檢者采晨起空腹血為宜。4.4藥物的影響：目前文獻尚無發(fā)現(xiàn)對其影響的報道，有待進一步完善。4.5輸血及輸液的影響：標本采集應避開
5、輸血及輸液側。4.6標本的采集、保存、送檢及處理。4.6.1標本的采集：A：種類：新鮮血清或血漿。B：時間：原則上以晨起空腹時采集標本。C：靜脈采血：首選肘靜脈，必要時采集其它靜脈。D：采集方法：按照常規(guī)標本采集方法采集。E：容器要求：標本應采集至真空管（含或不含分離膠的普通生化管）管上應標有病人姓名、床號、科室、住院號或條形碼唯一標識。F：標本采集量：一般常3ml全血，無需抗凝防腐，血清或血漿至少需600ul。4.6.2標本拒收標準：A:嚴重的溶血、脂血標本。B：血量不足。C：采集的標本離送檢時間過長。D：用錯采血容器。E：唯一性
6、標志錯誤或不清楚。F：輸血、輸液中采集的標本或同側采血。G：其它4.6.3標本的處理方法：標本采集后應盡快送實驗室，檢驗科核對標本后，雙方登記簽字確認，轉送免疫室。免疫室人員進行編碼后立即離心，按常規(guī)方法分離血清。4.6.4標本儲存預知：血清儲存于4℃-20℃，10天內穩(wěn)定，室溫放置，2d內穩(wěn)定，如當日不能測定，推薦將血清保存于-20℃一周內完成測定。5試劑：本試劑購自北京宇輝佳誠科技發(fā)展有限公司。A：試劑盒組份：梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（膠體金法）40人份一次性塑料吸管40人份緩沖液2瓶B：試劑盒應儲存于4-30℃，陰涼避光干燥處
7、，有效期24個月。鄂爾多斯市檢驗科免疫室作業(yè)指導書文件編號：EEDSZXY-3-MY-33版本/修訂號:A/O生效日期：20090401主題內容梅毒螺旋體抗體膠體金法測定編制人：牛兵審核人：段寶生第127頁共135頁6操作步驟：在進行測試前將試劑和標本恢復至室溫（20-30℃）。6.1將試劑盒置于干凈平坦的臺面上，用塑料吸管吸取血清/血漿標本，垂直滴入1滴（約25ul）于加樣孔S中，然后加入2滴緩沖液（約75ul）于加樣孔S中。6.2等待紫紅色條帶的出現(xiàn)，在15分鐘內讀取測試結果。關鍵要注意，在紫紅色條帶出現(xiàn)以前，背景要清晰，特別當
8、樣本中含有低滴度的抗梅毒抗體，會導致出現(xiàn)的T線顏色很淡，此時更需注意背景清晰。在30分鐘后讀取放入結果無效。7結果判斷：陽性（+）：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)內（T），另一條位于質控區(qū)內（C）內。陽性結果表明：標本中含有梅毒抗
