梅毒螺旋體抗體膠體金法測定

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1、鄂爾多斯市檢驗科免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：EEDSZXY-3-MY-33版本/修訂號:A/O生效日期：20090401主題內(nèi)容梅毒螺旋體抗體膠體金法測定編制人：牛兵審核人：段寶生第125頁共135頁梅毒螺旋體抗體膠體金法測定1【目的】定性檢測血清或血漿中是否含有梅毒抗體2【該SOP變動程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并經(jīng)下述人員批準(zhǔn)：專業(yè)主管，科主任。3原理梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（膠體金法）采用高度特異性的抗體抗原反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)來定性檢測血清/血漿中是否含有梅毒抗體，試

2、劑盒含有被事先固定于膜上測試區(qū)（T）的重組特異性梅毒抗原和質(zhì)控區(qū)（C）的相應(yīng)抗體。測試時，血漿/血清標(biāo)本滴入試劑盒加樣孔（S）內(nèi)，血標(biāo)本中的梅毒抗體與預(yù)包被在膜上的膠體金結(jié)合物反應(yīng)。然后，混合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析，在測試區(qū)（T）與固定在膜上的重組特異性梅毒抗原反應(yīng)。如果血清中含有抗梅毒抗體，在測試區(qū)內(nèi)（T）會出現(xiàn)一條紫紅色條帶，表明時陽性結(jié)果。如果在測試區(qū)內(nèi)（T）沒有出現(xiàn)紫紅色條帶，則血標(biāo)本中不含有抗梅毒抗體，表明是陰性結(jié)果。無論抗梅毒抗體是否存在于血標(biāo)本中，混合物都會繼續(xù)向上層析至質(zhì)控區(qū)（C），質(zhì)控區(qū)的

3、相應(yīng)抗體與膠體金結(jié)合物反應(yīng)出現(xiàn)一條紫紅色條帶。質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。4標(biāo)本采集與處理：4.1受檢者準(zhǔn)備：4.1.1受檢者的狀態(tài)：a.不可變的生物因素：年齡，性別，生活環(huán)境遺傳；b.可變的生物因素：A）情緒：原則上患者應(yīng)在平靜，休息的狀態(tài)下以晨起空腹時采集標(biāo)本，患者對采集標(biāo)本時的恐懼、緊張會造成標(biāo)本采集的失敗。B）運動：受檢者應(yīng)處于平靜狀態(tài)下采集標(biāo)本，可減少由于運動帶來的影響。C）生理節(jié)律變化：晝夜的生理變化可能使測定結(jié)果不恒定，晨起固定時間空腹血

4、盡可能減少晝夜節(jié)律帶來的影響。4.2采取標(biāo)本時：A）體位：除非是臥床的病人，一般采血時取坐位。鄂爾多斯市檢驗科免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：EEDSZXY-3-MY-33版本/修訂號:A/O生效日期：20090401主題內(nèi)容梅毒螺旋體抗體膠體金法測定編制人：牛兵審核人：段寶生第126頁共135頁B）止血帶：一般從肘靜脈采血使用止血帶的時間不宜超過1min，穿刺成功后立即松開止血帶，靜脈阻滯也可影響。4.3受檢者的飲食：餐后采集的標(biāo)本，易發(fā)現(xiàn)乳糜狀，影響檢驗測定的正確性，故應(yīng)囑受檢者采晨起空腹血為宜。4.4藥物的影響

5、：目前文獻尚無發(fā)現(xiàn)對其影響的報道，有待進一步完善。4.5輸血及輸液的影響：標(biāo)本采集應(yīng)避開輸血及輸液側(cè)。4.6標(biāo)本的采集、保存、送檢及處理。4.6.1標(biāo)本的采集：A：種類：新鮮血清或血漿。B：時間：原則上以晨起空腹時采集標(biāo)本。C：靜脈采血：首選肘靜脈，必要時采集其它靜脈。D：采集方法：按照常規(guī)標(biāo)本采集方法采集。E：容器要求：標(biāo)本應(yīng)采集至真空管（含或不含分離膠的普通生化管）管上應(yīng)標(biāo)有病人姓名、床號、科室、住院號或條形碼唯一標(biāo)識。F：標(biāo)本采集量：一般常3ml全血，無需抗凝防腐，血清或血漿至少需600ul。4.6.2標(biāo)

6、本拒收標(biāo)準(zhǔn)：A:嚴(yán)重的溶血、脂血標(biāo)本。B：血量不足。C：采集的標(biāo)本離送檢時間過長。D：用錯采血容器。E：唯一性標(biāo)志錯誤或不清楚。F：輸血、輸液中采集的標(biāo)本或同側(cè)采血。G：其它4.6.3標(biāo)本的處理方法：標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送實驗室，檢驗科核對標(biāo)本后，雙方登記簽字確認(rèn)，轉(zhuǎn)送免疫室。免疫室人員進行編碼后立即離心，按常規(guī)方法分離血清。4.6.4標(biāo)本儲存預(yù)知：血清儲存于4℃-20℃，10天內(nèi)穩(wěn)定，室溫放置，2d內(nèi)穩(wěn)定，如當(dāng)日不能測定，推薦將血清保存于-20℃一周內(nèi)完成測定。5試劑：本試劑購自北京宇輝佳誠科技發(fā)展有限公司。A：

7、試劑盒組份：梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（膠體金法）40人份一次性塑料吸管40人份緩沖液2瓶B：試劑盒應(yīng)儲存于4-30℃，陰涼避光干燥處，有效期24個月。鄂爾多斯市檢驗科免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：EEDSZXY-3-MY-33版本/修訂號:A/O生效日期：20090401主題內(nèi)容梅毒螺旋體抗體膠體金法測定編制人：牛兵審核人：段寶生第127頁共135頁6操作步驟：在進行測試前將試劑和標(biāo)本恢復(fù)至室溫（20-30℃）。6.1將試劑盒置于干凈平坦的臺面上，用塑料吸管吸取血清/血漿標(biāo)本，垂直滴入1滴（約25ul）于加樣孔S中

8、，然后加入2滴緩沖液（約75ul）于加樣孔S中。6.2等待紫紅色條帶的出現(xiàn)，在15分鐘內(nèi)讀取測試結(jié)果。關(guān)鍵要注意，在紫紅色條帶出現(xiàn)以前，背景要清晰，特別當(dāng)樣本中含有低滴度的抗梅毒抗體，會導(dǎo)致出現(xiàn)的T線顏色很淡，此時更需注意背景清晰。在30分鐘后讀取放入結(jié)果無效。7結(jié)果判斷：陽性（+）：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)內(nèi)（T），另一條位于質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）內(nèi)。陽性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有梅毒抗