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《產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)規(guī)程.doc》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、1目的：建立產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。2適用范圍：適用于本公司產(chǎn)品的無菌檢驗(yàn)。3依據(jù)GB/T14233.2-2005《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第2部分生物學(xué)試驗(yàn)方法》《中華人民共和國藥典2015版》通則1101無菌檢查法4設(shè)備、用具與試劑4.1設(shè)備要求百級潔凈臺、恒溫培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器4.2用具試管及試管架、移液管（1mL）、培養(yǎng)皿（90mm）、洗耳球、剪刀、鋼尺、鑷子、酒精燈4.3試劑硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，純化水，75%乙醇5試驗(yàn)前準(zhǔn)備5.1培養(yǎng)基的
2、制備5.1.1硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：準(zhǔn)確稱取5.85g硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基至干凈的燒杯中，加入200mL純化水，加熱攪拌溶解后分裝至試管中，不少于15mL/支，每批產(chǎn)品分裝數(shù)量為10支。5.1.2胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基：準(zhǔn)備稱取6g胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基至干凈的燒杯中，加入200mL純化水，加熱攪拌溶解后分裝至試管中，不少于10mL/支，每批分裝數(shù)量為10支。5.1.3上述培養(yǎng)基分裝后，在試管上做好標(biāo)記，用牛皮紙包裹好試管塞，放入高壓蒸汽滅菌器中進(jìn)行121℃滅菌15min。5.1.4滅菌后將兩種培養(yǎng)基分別放于試管架上自然冷卻，注意觀察培養(yǎng)基的顏色
3、，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基氧化層應(yīng)為粉紅色，且高度不得超過培養(yǎng)基高度的1/5。5.1.5大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基：準(zhǔn)確稱取10g大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基至燒瓶中，加入250mL純化水加熱充分溶解后121℃滅菌15min，待培養(yǎng)基于45℃左右時(shí)，將其傾注于培養(yǎng)皿中15-20ml備用。5.2試驗(yàn)用器具準(zhǔn)備5.2.1將試驗(yàn)用到的剪刀、鑷子、移液管（1mL）放入飯盒中進(jìn)行121℃滅菌30min，滅菌后備用。5.3人員、物料進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室5.3.1人員進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室按照《潔凈間人員凈化管理規(guī)范》執(zhí)行。5.3.2試驗(yàn)用器具、試劑、樣品滅菌后放入傳遞窗紫外燈照射30m
4、in后進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室。5.4無菌檢驗(yàn)環(huán)境要求5.4.1無菌室在使用之前進(jìn)行臭氧消毒。5.4.2試驗(yàn)開始前對百級工作臺進(jìn)行紫外照射30min。5.4.3無菌檢驗(yàn)過程中檢查百級工作臺中的空氣菌落數(shù)：每次操作時(shí)在臺面的左中右位置擺放三個(gè)大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基平皿，打開平皿蓋在空氣中暴露，至試驗(yàn)結(jié)束，蓋好進(jìn)行培養(yǎng)。3個(gè)平皿上的菌落數(shù)平均不超過1個(gè)。6試驗(yàn)步驟6.1樣品數(shù)量每個(gè)滅菌批隨機(jī)抽取3個(gè)樣品進(jìn)行無菌檢驗(yàn)。6.2無菌檢驗(yàn)方法直接接種法：取待測樣品的關(guān)鍵部位，裁剪成一個(gè)2cm×3cm的碎片，然后接種于兩種培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察并進(jìn)行記錄。6.3具體操
5、作6.3.1樣品制備與接種無菌操作的條件下，在百級工作臺中打開樣品包裝，將樣品剪成2cm×3cm的碎片，分別放入5管硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和5管胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。操作時(shí)，先點(diǎn)燃酒精燈，左手握住裝有培養(yǎng)基的試管，將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼，右手用無名指、小指及掌部夾住塞子，拔開塞子，同時(shí)右手持滅菌鑷子夾起碎片迅速投入試管中，灼燒試管口塞上塞子，使樣品充分沒入培養(yǎng)基中。剪刀和鑷子每次使用之前在酒精燈火焰灼燒，保持無菌狀態(tài)。取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基1管，不接種作為陰性對照。6.3.2培養(yǎng)觀察硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置30~35℃，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置2
6、0~25℃培養(yǎng)14d。每天觀察進(jìn)行記錄。7結(jié)果判定7.1陰性對照管不得有菌生長。7.2若樣品管均澄清，或雖顯混濁但經(jīng)確認(rèn)無菌生長，判定符合規(guī)定；若樣品管中任何一管出現(xiàn)混濁并證明有菌生長，則判定樣品不符合規(guī)定。8檢驗(yàn)頻次：隨產(chǎn)品的滅菌批次，每批產(chǎn)品滅菌后24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行檢測。9《無菌檢驗(yàn)觀察記錄》
