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《銀杏葉發(fā)酵和未發(fā)酵提取物抑菌活性探究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、銀杏葉發(fā)酵和未發(fā)酵提取物抑菌活性探究 [摘要]目的對比銀杏葉發(fā)酵與未發(fā)酵萃取物提取物的抑菌活性。方法利用冠突散囊菌在銀杏葉培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，將得到的發(fā)酵液以及未發(fā)酵的銀杏葉水提物依次進行石油醚、乙酸乙酯的萃取，選取各部位提取物進行對指示菌種（枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、蠟樣芽孢桿菌）進行藥敏紙片法抑菌試驗。選取未發(fā)酵部分乙酸乙酯提取物進行最小抑菌濃度的測定。結(jié)果銀杏葉未發(fā)酵乙酸乙酯提取物對供試菌的抑制作用較顯著，而且抑菌活性與樣品濃度不成正相關(guān)。未發(fā)酵乙酸乙酯提取物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌的最小抑菌濃度分別為
2、：2.5、2.5、5.0、10.0g/mL。結(jié)論銀杏葉發(fā)酵與未發(fā)酵的乙酸乙酯提取物對枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌和大腸桿菌均有一定的抑制作用，而未發(fā)酵作用較明顯。石油醚提取物在發(fā)酵前后抑菌活性變化不大。說明銀杏葉中主要的抑菌成分存在于乙酸乙酯極性段，發(fā)酵過程中，由于微生物轉(zhuǎn)化，造成銀杏葉中抑菌活性成分減少。[關(guān)鍵詞]銀杏葉；冠突散囊菌；發(fā)酵；抑菌；乙酸乙酯提取物[中圖分類號]R285[文獻標識碼]A[文章編號]61673-7210（2013）12（b）-0130-04冠突散囊菌，又稱“金花”菌，是茯磚茶的優(yōu)勢菌種。茯磚茶通過冠突散囊菌的代
3、謝等作用，茶葉發(fā)生深度的良性生理生化變化，滋味更醇厚，茶香更純正。同時在“金花”菌的作用下，茯磚茶具有消食健胃以及降脂的功效[1-2]。銀杏又名白果，屬我國特產(chǎn)植物資源，其產(chǎn)量占世界總量的70%以上。銀杏和銀杏葉的提取物（Ginkgobilobaextract，GBE）因含有黃酮類、內(nèi)酯類、酚類等多種活性成分而具有重要的藥用價值。GBE的抑菌活性與其含有的黃酮類的活性成分有關(guān)[3]。武雪芬等[4]通過實驗發(fā)現(xiàn)植物濃縮液乙酸乙酯層含有大量的黃酮類成分，因此本實驗通過與石油醚提取物的對比，考察發(fā)酵與未發(fā)酵乙酸乙酯提取物的抑菌活性。1儀器與試藥1.1藥材銀杏
4、葉Ginkgobiloba采于2012年10月清華大學(xué)校園，50℃烘干，至干燥通風(fēng)處保存。1.2試劑、菌株及設(shè)備6馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基（PDA）（北京奧博星生物技術(shù)有限公司）；瓊脂（北京拜爾迪生物有限公司）；酵母膏、牛肉膏（北京奧博星生物有限公司）；鏈霉素（意大利Inalco公司）；二甲基亞砜（DMSO）（北京Biodee生物技術(shù)有限公司）冠突散囊菌（eurotiumcristatum）、枯草芽孢桿菌（bacillussubtilis）、金黃色葡萄球菌（staphylococcusaureus）、大腸桿菌（escherichiacoli）、蠟樣芽孢桿菌（b
5、acilluscereus）購自中國普通微生物菌種保藏管理中心（CGMCC），其余試劑均為分析純，購自北京化工廠。FW100型粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；旋蒸儀（日本EYELA公司）；SVE-4A1型垂直流超凈工作臺（新加坡ESCO公司）；AL204-IC型電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；THZ-D型臺式恒溫振蕩器（蘇州培英實驗設(shè)備有限公司）；SHZ-CB型循環(huán)水式真空泵（鞏義市英峪予華儀器廠）；pH計（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；恒溫培養(yǎng)箱（德國MMMIncucell系列）；微量移液器（美國Thermo公司）。2方法
6、與結(jié)果2.1冠突散囊菌懸液的制備在PDA平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)冠突散囊菌，待4d后平板長滿菌落，在無菌條件下，加無菌水5mL于平板上，用接種環(huán)將黃色閉囊殼刮下，懸浮于無菌水中，再將懸浮液倒入帶有玻璃珠和95mL的三角瓶內(nèi)，150r/min振搖20min，制成均勻的孢子懸液。調(diào)整孢子濃度為5.0×108～6.0×108cfu/mL。2.2銀杏葉培養(yǎng)基的制備6參照GB8305-87茶水浸出物標準[5]，將銀杏葉打成細粉，過60目篩。稱取8.0g銀杏葉粉末試樣于1L沸蒸餾水中，浸提45min（每隔10min搖動1次），立即減壓過濾，殘渣用少量蒸餾水洗2～3次，合并
7、濾液于2L容量瓶，冷卻后用蒸餾水定容至刻度。以鄧放明[6]篩選的最優(yōu)培養(yǎng)基配方作為參考，確定培養(yǎng)基成分為：含0.8%（m：V）銀杏葉的浸提液加6%（m∶V）的蔗糖，pH=5.5。配制好的培養(yǎng)基在121℃下高壓蒸汽滅菌20min。2.3接種與發(fā)酵培養(yǎng)將制備好的孢子懸液在無菌條件下接種到培養(yǎng)基中，使得接種量為5%（V∶V）。以鄧放明[6]篩選的最優(yōu)培養(yǎng)基配方作為參考，發(fā)酵條件為30℃，120r/min條件下培養(yǎng)7d。2.4發(fā)酵液的萃取真空抽濾所得的發(fā)酵液，將得到的濾液依次進行石油醚，乙酸乙酯的萃取并用旋蒸儀蒸干溶劑，稱重得發(fā)酵液石油醚、乙酸乙酯提取物。2.
8、5供試菌懸液的制備供試菌種經(jīng)活化后，挑取一個菌落接種到牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中配成菌懸液，金黃
