GB5009.235-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基酸態(tài)氮的測定.pdf

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中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB5009.235—2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基酸態(tài)氮的測定2016-08-31發(fā)布2017-03-01實施中華人民共和國發(fā)布國家衛(wèi)生和計劃生育委員會 GB5009.235—2016前言本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T5009.39—2003《醬油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》中4.2氨基酸態(tài)氮,GB/T5009.40—2003《醬衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》中4.1氨基酸態(tài)氮,SB/T10310—1999《黃豆醬檢驗方法》中3.3氨基氮。本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T5009.39—2003相比,主要變化如下:———標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基酸態(tài)氮的測定”;———擴充了第一法的適用范圍;———修改了原標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)。Ⅰ GB5009.235—2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基酸態(tài)氮的測定1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醬油、醬、黃豆醬中氨基酸態(tài)氮的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)第一法適用于以糧食和其副產(chǎn)品豆餅、麩皮等為原料釀造或配制的醬油,以糧食為原料釀造的醬類,以黃豆、小麥粉為原料釀造的豆醬類食品中氨基酸態(tài)氮的測定;第二法適用于以糧食和其副產(chǎn)品豆餅、麩皮等為原料釀造或配制的醬油中氨基酸態(tài)氮的測定。第一法酸度計法2原理利用氨基酸的兩性作用,加入甲醛以固定氨基的堿性,使羧基顯示出酸性,用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定后定量,以酸度計測定終點。3試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的三級水。3.1試劑3.1.1甲醛(36%~38%):應(yīng)不含有聚合物(沒有沉淀且溶液不分層)。3.1.2氫氧化鈉(NaOH)。3.1.3酚酞(C20H14O4)。3.1.4乙醇(CH3CH2OH)。3.1.5鄰苯二甲酸氫鉀(HOOCC6H4COOH):基準(zhǔn)物質(zhì)。3.2試劑配制氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]:經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液或配制方法如下:a)酚酞指示液:稱取酚酞1g,溶于95%的乙醇中,用95%乙醇稀釋至100mL。b)氫氧化鈉溶液[氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c(NaOH)=0.05mol/L]:稱取110g氫氧化鈉于250mL的燒杯中,加100mL的水,振搖使之溶解成飽和溶液,冷卻后置于聚乙烯的塑料瓶中,密塞,放置數(shù)日,澄清后備用。取上層清液2.7mL,加適量新煮沸過的冷蒸餾水至1000mL,搖勻。c)氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的標(biāo)定:準(zhǔn)確稱取約0.36g在105℃~110℃干燥至恒重的基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀,加80mL新煮沸過的水,使之盡量溶解,加2滴酚酞指示液(10g/L),用氫氧化鈉溶液滴定至溶液呈微紅色,30s不褪色。記下耗用氫氧化鈉溶液毫升數(shù)。同時做空白試驗。1 GB5009.235—2016d)計算:氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度按式(1)計算:mc=……………………………(1)(V)×0.20421-V2式中:c———氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實際濃度,單位為摩爾每升(mol/L);m———基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量,單位為克(g);V1———氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量體積,單位為毫升(mL);V2———空白實驗中氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量體積,單位為毫升(mL);0.2042———與1.00mL氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(NaOH)=1.000mol/L]相當(dāng)?shù)幕鶞?zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量,單位為克(g)。4儀器和設(shè)備4.1酸度計(附磁力攪拌器)。4.210mL微量堿式滴定管。4.3分析天平:感量0.1mg。5分析步驟5.1醬油試樣稱量5.0g試樣于50mL的燒杯中,用水分?jǐn)?shù)次洗入100mL容量瓶中,加水至刻度,混勻后吸取20.0mL置于200mL燒杯中,加60mL水,開動磁力攪拌器,用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]滴定至酸度計指示pH為8.2,記下消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的毫升數(shù),可計算總酸含量。加入10.0mL甲醛溶液,混勻。再用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液繼續(xù)滴定至pH為9.2,記下消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的毫升數(shù)。同時取80mL水,先用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]調(diào)節(jié)至pH為8.2,再加入10.0mL甲醛溶液,用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至pH為9.2,做試劑空白試驗。5.2醬及黃豆醬樣品將醬或黃豆醬樣品攪拌均勻后,放入研缽中,在10min內(nèi)迅速研磨至無肉眼可見顆粒,裝入磨口瓶中備用。用已知重量的稱量瓶稱取攪拌均勻的樣品5.0g,用50mL80℃左右的蒸餾水分?jǐn)?shù)次洗入100mL燒杯中,冷卻后,轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中,用少量水分次洗滌燒杯,洗液并入容量瓶中,并加水至刻度,混勻后過濾。吸取濾液10.0mL,置于200mL燒杯中,加60mL水,開動磁力攪拌器,用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]滴定至酸度計指示pH為8.2,記下消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的毫升數(shù),可計算總酸含量。加入10.0mL甲醛溶液,混勻。再用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液繼續(xù)滴定至pH為9.2,記下消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的毫升數(shù)。同時取80mL水,先用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]調(diào)節(jié)至pH為8.2,再加入10.0mL甲醛溶液,用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至pH為9.2,做試劑空白試驗。6分析結(jié)果的表述試樣中氨基酸態(tài)氮的含量按式(2)進行計算:(V)×c×0.0141-V2X=×100……………………………(2)m×V3/V42 GB5009.235—2016式中:X———試樣中氨基酸態(tài)氮的含量,單位為克每百克(g/100g);V1———測定用試樣稀釋液加入甲醛后消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積,單位為毫升(mL);V2———試劑空白實驗加入甲醛后消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積,單位為毫升(mL);c———氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度,單位為摩爾每升(mol/L);0.014———與1.00mL氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(NaOH)=1.000mol/L]相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量,單位為克(g);m———稱取試樣的質(zhì)量,單位為克(g);V3———試樣稀釋液的取用量,單位為毫升(mL);V4———試樣稀釋液的定容體積,單位為毫升(mL);100———單位換算系數(shù)。計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。7精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。第二法比色法8原理在pH為4.8的乙酸鈉-乙酸緩沖液中,氨基酸態(tài)氮與乙酰丙酮和甲醛反應(yīng)生成黃色的3,5-二乙酸-2,6-二甲基-1,4二氫化吡啶氨基酸衍生物。在波長400nm處測定吸光度,與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。9試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的二級水。9.1試劑9.1.1乙酸(CH3COOH)。9.1.2無水乙酸鈉(CH3COONa)或乙酸鈉(CH3COONa·3H2O)。9.1.3甲醇(CH3OH)。9.1.4乙酰丙酮(C5H8O2)。9.2試劑配制9.2.1乙酸溶液(1mol/L):量取5.8mL冰乙酸,加水稀釋至100mL。9.2.2乙酸鈉溶液(1mol/L):稱取41g無水乙酸鈉或68g乙酸鈉(CH3COONa·3H2O),加水溶解后并稀釋至500mL。9.2.3乙酸鈉-乙酸緩沖液:量取60mL乙酸鈉溶液(1mol/L)與40mL乙酸溶液(1mol/L)混合,該溶液pH為4.8。9.2.4顯色劑:15mL37%甲醇與7.8mL乙酰丙酮混合,加水稀釋至100mL,劇烈振搖混勻(室溫下放置穩(wěn)定3d)。3 GB5009.235—20169.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制9.3.1氨氮標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(1.0mg/mL):精密稱取105℃干燥2h的硫酸銨0.4720g于小燒杯中,加水溶解后移至100mL容量瓶中,并稀釋至刻度,混勻,此溶液每毫升相當(dāng)于1.0mg氨氮(10℃下冰箱內(nèi)貯存穩(wěn)定1年以上)。9.3.2氨氮標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(0.1g/L):用移液管精確量取10mL氨氮標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1.0mg/mL)于100mL容量瓶內(nèi),加水稀釋至刻度,混勻,此溶液每毫升相當(dāng)于100μg氨氮(10℃下冰箱內(nèi)貯存穩(wěn)定1個月)。10儀器和設(shè)備10.1分光光度計。10.2電熱恒溫水浴鍋(100℃±0.5℃)。10.310mL具塞玻璃比色管。11分析步驟11.1試樣前處理稱量1.00g試樣于50mL容量瓶中,加水稀釋至刻度,混勻。11.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密吸取氨氮標(biāo)準(zhǔn)使用溶液0mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL(相當(dāng)于NH3-N0μg、5.0μg、10.0μg、20.0μg、40.0μg、60.0μg、80.0μg、100.0μg)分別于10mL比色管中。向各比色管分別加入4mL乙酸鈉-乙酸緩沖溶液(pH4.8)及4mL顯色劑,用水稀釋至刻度,混勻。置于100℃水浴中加熱15min,取出,水浴冷卻至室溫后,移入1cm比色皿內(nèi),以零管為參比,于波長400nm處測量吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計算線性回歸方程。11.3試樣的測定精密吸取2mL試樣稀釋溶液于10mL比色管中。加入4mL乙酸鈉-乙酸緩沖溶液(pH4.8)及4mL顯色劑,用水稀釋至刻度,混勻。置于100℃水浴中加熱15min,取出,水浴冷卻至室溫后,移入1cm比色皿內(nèi),以零管為參比,于波長400nm處測量吸光度。試樣吸光度與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量或代入線性回歸方程,計算試樣含量。12分析結(jié)果的表述試樣中氨基酸態(tài)氮的含量按式(3)進行計算:mX=×100……………………………(3)m1×1000×1000×V1/V2式中:X———試樣中氨基酸態(tài)氮的含量,單位為克每百克(g/100g);m———試樣測定液中氮的質(zhì)量,單位為微克(μg);m1———稱取試樣的質(zhì)量,單位為克(g);V1———測定用試樣溶液體積,單位為毫升(mL);V2———試樣前處理中的定容體積,單位為毫升(mL);4 GB5009.235—2016100、1000———單位換算系數(shù)。13精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。14其他本方法的檢出限為0.0070mg/100g,定量限為0.0210mg/100g。5