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《乳鼠心肌細胞的培養(yǎng)》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1實驗材料實驗方法操作步驟及人員落實預(yù)期結(jié)果實驗?zāi)康囊饬x
2目的:掌握原代細胞培養(yǎng)的一般方法和步驟及培養(yǎng)過程中的無菌操作技術(shù),熟悉原代培養(yǎng)細胞的觀察方法。意義:原代培養(yǎng)是指直接從機體取出細胞、組織和器官后立即置于培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細胞得以生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)細胞離體時間短,細胞保持體內(nèi)原有的基本性質(zhì),適用于研究。一般說來,幼稚狀態(tài)的組織和細胞(如動物的胚胎、幼仔的臟器)等更容易進行原代培養(yǎng)。
3儀器:培養(yǎng)箱(調(diào)整至37℃)、培養(yǎng)瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術(shù)器械、血細胞計數(shù)板、離心機、水浴箱(37℃)。試劑:1640培養(yǎng)基(含10%小牛血清)、75%酒精、Hanks液、0.125%胰酶消化液、碘酒、碳酸氫鈉液、鹽酸液。材料:乳鼠的心臟
4前期準(zhǔn)備實驗取材消化組織培養(yǎng)細胞
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6用鑷子夾住小鼠尾巴將小鼠在酒精中浸泡兩次,約2~3秒;用剪刀將小鼠頭部剪去;將動物固取材器官范圍的被毛,定在解剖板上并將胸部剪開暴露出心臟,用另一個剪刀將小鼠心臟剪下;放入裝有預(yù)冷的Hanks液的培養(yǎng)皿中,將心臟剪開,剪碎組織至1mm3左右,清洗殘留的血液。
7將心肌組織轉(zhuǎn)移至另一個裝有預(yù)冷的Hanks液的培養(yǎng)皿中進一步剪碎心臟后,加入等體積的0.125%胰酶;將心肌組織轉(zhuǎn)移至離心管中,用吸管反復(fù)吹打(使消化下來的細胞徹底從組織團快上掉下來)10min,靜置2min后,棄上清;再次加入Hanks液和等體積的0.125%胰酶,常溫下用吸管反復(fù)吹打10min,靜置2min后將上層液轉(zhuǎn)移至100ml容器中,加入含10%小牛血清的1640培養(yǎng)基終止消化;重復(fù)上一步驟至組織完全消化,適當(dāng)控制消化時間。
8加入培養(yǎng)液1~2ml(視細胞量),血球計數(shù)板計數(shù);將細胞調(diào)整到5×105個細胞/ml左右,轉(zhuǎn)移至25ml細胞培養(yǎng)瓶中;至置培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。24h后換液繼續(xù)觀察培養(yǎng)。
9操作步驟及人員落實
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11預(yù)期結(jié)果
12謝謝觀看!預(yù)祝實驗圓滿成功!PS:部分?jǐn)?shù)據(jù)根據(jù)實驗具體情況修改。