乳鼠心肌細胞的培養(yǎng)

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1實驗材料實驗方法操作步驟及人員落實預(yù)期結(jié)果實驗?zāi)康囊饬x

2目的：掌握原代細胞培養(yǎng)的一般方法和步驟及培養(yǎng)過程中的無菌操作技術(shù)，熟悉原代培養(yǎng)細胞的觀察方法。意義：原代培養(yǎng)是指直接從機體取出細胞、組織和器官后立即置于培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)細胞離體時間短，細胞保持體內(nèi)原有的基本性質(zhì)，適用于研究。一般說來，幼稚狀態(tài)的組織和細胞（如動物的胚胎、幼仔的臟器）等更容易進行原代培養(yǎng)。

3儀器：培養(yǎng)箱（調(diào)整至37℃）、培養(yǎng)瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術(shù)器械、血細胞計數(shù)板、離心機、水浴箱（37℃）。試劑：1640培養(yǎng)基（含10%小牛血清）、75%酒精、Hanks液、0.125%胰酶消化液、碘酒、碳酸氫鈉液、鹽酸液。材料：乳鼠的心臟

4前期準(zhǔn)備實驗取材消化組織培養(yǎng)細胞

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6用鑷子夾住小鼠尾巴將小鼠在酒精中浸泡兩次，約2~3秒；用剪刀將小鼠頭部剪去；將動物固取材器官范圍的被毛，定在解剖板上并將胸部剪開暴露出心臟，用另一個剪刀將小鼠心臟剪下；放入裝有預(yù)冷的Hanks液的培養(yǎng)皿中，將心臟剪開,剪碎組織至1mm3左右，清洗殘留的血液。

7將心肌組織轉(zhuǎn)移至另一個裝有預(yù)冷的Hanks液的培養(yǎng)皿中進一步剪碎心臟后，加入等體積的0.125％胰酶；將心肌組織轉(zhuǎn)移至離心管中，用吸管反復(fù)吹打（使消化下來的細胞徹底從組織團快上掉下來）10min,靜置2min后，棄上清；再次加入Hanks液和等體積的0.125％胰酶，常溫下用吸管反復(fù)吹打10min，靜置2min后將上層液轉(zhuǎn)移至100ml容器中，加入含10%小牛血清的1640培養(yǎng)基終止消化；重復(fù)上一步驟至組織完全消化，適當(dāng)控制消化時間。

8加入培養(yǎng)液1~2ml（視細胞量）,血球計數(shù)板計數(shù)；將細胞調(diào)整到5×105個細胞/ml左右，轉(zhuǎn)移至25ml細胞培養(yǎng)瓶中；至置培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。24h后換液繼續(xù)觀察培養(yǎng)。

9操作步驟及人員落實

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11預(yù)期結(jié)果

12謝謝觀看！預(yù)祝實驗圓滿成功！PS：部分?jǐn)?shù)據(jù)根據(jù)實驗具體情況修改。