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1、東當歸乙醇提取物對小鼠學習記憶的影響【關鍵詞】東當歸學習記憶避暗實驗跳臺實驗水迷宮實驗 老年癡呆是一種異質性疾病,具有特征性神經(jīng)病理和神經(jīng)化學改變,發(fā)病多為老年前期,但老年期的發(fā)病率更高[1]。65歲以上老人中明顯癡呆者約占2%~5%,而85歲以上的老人中幾乎一半患有不同程度的老年癡呆。當歸芍藥散是由當歸、芍藥、川芎、茯苓、白術、澤瀉組成的傳統(tǒng)中藥處方,國內外文獻報道其對老年癡呆癥具有一定的治療效果[2,3]。但是當歸單味藥材對老年性癡呆療效研究報道不多。因此,本實驗主要研究東當歸乙醇提取物對小鼠學習記憶的改善作用?! ?材料與儀器 1.1動物實驗用小鼠,購于延邊大學藥學院動物科,
2、體質量(20±2)g?! ?.2試藥與儀器東當歸,氫溴酸東莨菪堿注射液(SCOP)(上海禾豐制藥有限公司),石杉堿甲(河南竹林眾生制藥股份有限公司),無水乙醇為分析純,蒸餾水。YLS-3T型跳臺記錄儀(山東省醫(yī)學科學院設備站),RE-52C旋轉蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司),方型水迷宮儀(中國醫(yī)學科學院藥物研究所),Y型電迷宮儀(中國醫(yī)學科學院藥物研究所)?! ?方法 2.1東當歸乙醇提取物的制備東當歸粉碎過20目篩,準確稱取,加入8倍量80%乙醇加熱回流提取2h,共3次,合并濾液,減壓抽濾,將濾液于水浴上減壓蒸餾至無醇味,得到當歸的乙醇提取物?! ?.2實驗藥物劑量設置東當歸高劑量
3、為500mg/kg,中劑量為250mg/kg,低劑量為125mg/kg,氫溴酸東莨菪注射液2mg/kg,石杉堿甲85μg/kg?! ?.3實驗設計對小鼠學習記憶改善作用的研究實驗分別采用避暗實驗、跳臺實驗、水迷宮實驗、Y型迷宮穿梭實驗。實驗小鼠隨機分為6個組,每組含8~10只動物。實驗給藥劑量組分為石杉堿甲組(陽性組)、SCOP組、空白組、東當歸乙醇提取物高劑量組(東當歸A組)、東當歸乙醇提取物中劑量組(東當歸B組)、東當歸乙醇提取物低劑量組(當歸C組),連續(xù)灌胃30d,期間所有動物自由進食飲水,小鼠末次給藥后除空白組外,其余各組均注射SCOP,10min后進行各組實驗?! ?.3.1
4、避暗實驗采用被動回避性條件反射儀進行避暗實驗,將小鼠面部背向洞口放入明室,同時啟動記錄裝置,記錄小鼠第1次進入暗室的時間,此為觸電潛伏期,并記錄5min內小鼠進入暗室的錯誤次數(shù)作為記憶指標,24h后重復測試。 2.3.2跳臺實驗將小鼠放入跳臺反射箱內適應3min,然后通以38V交流電,小鼠受到電擊后多數(shù)跳上跳臺逃避電擊。記錄小鼠第1次跳下時間,此為觸電潛伏期,并記錄5min內小鼠跳下次數(shù),24h后重復測試?! ?.3.3水迷宮實驗造模后10min進行水迷宮訓練。第1次訓練將小鼠放在安全臺附近G4處,讓其自行游上終點兩次,第2次訓練將小鼠放在中部G2、G3處,然后第3次訓練時讓小鼠游全
5、程。設定時間為2min,超過2min不能游出者按2min計。記錄小鼠自迷宮起點游至安全臺所需時間和途中進入盲端的錯誤次數(shù),連續(xù)測試4d?! ?.3.4Y型迷宮穿梭實驗測試前將小鼠放置起步區(qū)的反射臂中,不通電,讓小鼠在三臂中進行探索,約2~3min待其穩(wěn)定后將小鼠抓至起步區(qū),燈亮后2s時,給予電刺激,直至小鼠最終逃到安全區(qū)后30s,熄燈,作為一次測驗。在24h后檢測小鼠10次訓練中的正確次數(shù)?! ?.4統(tǒng)計學方法應用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學處理,實驗數(shù)據(jù)以±s表示,采用t檢驗,以P<0.05為有統(tǒng)計學差異?! ?.3小鼠水迷宮實驗測試結果各組小鼠水迷宮實驗到達時間和錯
6、誤次數(shù)比較見表3~4。表3各組小鼠水迷宮實驗測實結果比較(略)與空白組比較,*P<0.05,△P<0.01;與模型組比較,﹟P<0.05;n=10表4各組小鼠水迷宮實驗進入盲端錯誤次數(shù)測實結果比較(略)與空白組比較,*P<0.05,△P<0.001;與模型組比較,﹟P<0.05,▲P<0.01;n=10 3.4小鼠Y型迷宮實驗測試結果各組小鼠Y型迷宮實驗在訓練中達到9/10正確的實驗次數(shù)與24h后10次中正確次數(shù)見表5。表5各組小鼠Y型迷宮穿梭實驗測實結果(略)與空白組比較,*P<0.05;與模型組比較,﹟P<0.05;n=10
7、 4討論 東當歸是傘形科植物,化學成分主要含揮發(fā)油、有機酸、氨基酸、維生素等多種物質,阿魏酸鈉也是當歸中有效單體成分,具有抗氧化、抗自由基、抗炎等藥理作用,有研究表明阿魏酸鈉能對抗Aβ引起的小鼠學習記憶損傷,改善小鼠的學習記憶功能[4]?! ”狙芯客ㄟ^進行避暗實驗、跳臺實驗、水迷宮實驗、Y型電迷宮穿梭實驗,均得出較相一致的結論,即在末次造模后,模型組與空白組比較,模型組成績明顯差于空白組,表明造模建立成功;東當歸低濃度組與模型組比較無顯著性差