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《厄貝沙坦對(duì)stz誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腎臟ctgf、p27kip1表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、厄貝沙坦對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腎臟CTGF、p27kip1表達(dá)的影響：黃海泉，劉必成，劉殿閣，羅冬冬，馬坤嶺[摘要]目的：觀察厄貝沙坦（Irb）對(duì)大鼠糖尿病模型腎臟結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）、p27kip1表達(dá)的影響。方法：將SD大鼠分為健康對(duì)照組(Ｃ組)、糖尿病腎病組(DN組)和糖尿病腎病Irb治療組(DNI組),DN組和DNI組大鼠制成糖尿病模型,DNI組予以50mg・kg-1伊貝沙坦灌胃。各組大鼠再分為4個(gè)亞組，分別于成模后1、2、4、8周時(shí)處死，觀察各組大鼠的血糖、體重、24h尿白蛋白、內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)、腎重、
2、腎臟肥大指數(shù)、腎小球面積(AG)和體積(VG)、腎小管面積(AT)、腎小球基底膜（GBM）厚度、腎小管基底膜（TBM）厚度的改變，通過免疫組化觀察腎CTGF和p27kip1的表達(dá)。結(jié)果：DN組和DNI組大鼠血糖較Ｃ組明顯升高且維持在一個(gè)較高水平(P<0.01)。Ｃ組體重增長(zhǎng)迅速，DN組和DNI組大鼠體重增長(zhǎng)緩慢(P<0.01)。DN組大鼠的24h尿白蛋白、Ccr、腎重、腎臟肥大指數(shù)、AT和VG在糖尿病早期即呈時(shí)間依賴性增加(P<0.01或P<0.05)。免疫組化半定量分析顯示，各期DN組大鼠腎小球和腎小管的CTGF、p2
3、7kip1表達(dá)均高于Ｃ組(P<0.01或P<0.05)。8周時(shí)DN組大鼠GBM和TBM均較Ｃ組明顯增厚(P<0.01)，而Irb可顯著抑制上述參數(shù)的增加。CTGF與p27kip1的表達(dá)、24h尿白蛋白、AT、AG、VG呈顯著正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。結(jié)論：早期應(yīng)用Irb可抑制糖尿病大鼠早期腎臟肥大和CTGF與p27kip1的表達(dá)，此為早期使用該藥預(yù)防DN腎臟肥大的發(fā)生提供了新的理論依據(jù)。[關(guān)鍵詞]厄貝沙坦;糖尿病;腎臟肥大;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子;p27kip1；大鼠結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connectivetissuegro等
4、[1]首次在培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了這種細(xì)胞因子,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),CTGF廣泛分布于人體各種組織、器官和體液中，具有促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂和胞外基質(zhì)合成、趨化,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,調(diào)節(jié)血管生成等作用，是一個(gè)重要的致纖維化因子[2]。我們近期體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)，CTGF可能介導(dǎo)了AngⅡ誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞肥大。周期素激酶抑制劑p27增多，在高糖培養(yǎng)系膜細(xì)胞肥大及糖尿病(DM)腎小球細(xì)胞肥大中起重要作用[34]。臨床及實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果表明厄貝沙坦(irbsartan，Irb)對(duì)糖尿病腎病(DN)有保護(hù)作用，可減輕腎臟肥大程度和蛋白尿，保護(hù)腎功能[57]
5、，但其確切機(jī)制尚不清楚。本研究擬在CTGF和p27水平探討Irb治療ＤＮ的作用機(jī)制，為防治DN提供一定的理論指導(dǎo)。1材料與方法1.1模型建立和分組將體重為（180±20）g的清潔級(jí)雄性SpragueDaa公司)(溶于pH4.0、0.1mol・L-1枸櫞酸枸櫞酸鈉緩沖液)50mg・kg-1建立DM模型，Ｃ組大鼠僅給予0.1mol・L-1枸櫞酸枸櫞酸鈉緩沖液腹腔注射。72h后大鼠尾靜脈采血測(cè)血糖,以隨機(jī)血糖高于16.7mmol・Ｌ-1作為大鼠DM模型建立標(biāo)準(zhǔn)。模型建立后即給予DNI組大鼠Irb
6、(法國(guó)Sanofi公司提供)50mg・kg-1・d-1灌胃，C組和DN組大鼠給予等量蒸餾水灌胃。實(shí)驗(yàn)期間,血糖過高的大鼠皮下注射胰島素。室溫18～20℃,濕度69%,12h交替照明,大鼠自由飲水、進(jìn)食。1.2觀察指標(biāo)和測(cè)定方法實(shí)驗(yàn)開始后每周稱體重（B1200EX型)。1.3病理定量分析HE染色切片,用CMIAS彩色圖像處理系統(tǒng)(深圳瑞醫(yī)科技發(fā)展有限公司),在400倍視野下每個(gè)標(biāo)本測(cè)50個(gè)腎小球的直徑和面積(AG)，并計(jì)算腎小球體積(ＶG)=4πｒ3/3(π=3.14,ｒ?yàn)槟I小球半徑)[8]。六氨銀染色切片,用CMIA
7、S彩色圖像處理系統(tǒng),在200倍視野下每個(gè)標(biāo)本測(cè)200個(gè)腎小管面積(AT)。腎組織的免疫組化半定量分析方法為，每個(gè)標(biāo)本在200倍圖像的腎皮質(zhì)區(qū)依次選40個(gè)視野,染色陽性部位的深淺及范圍以平均吸光度表示，p27kip1染色陽性部位及范圍以平均陽性細(xì)胞核數(shù)表示。1.4CTGF和p27kip1的表達(dá)腎組織切片經(jīng)二甲苯脫蠟、分級(jí)酒精水化后行免疫組化SP法(試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司)染色。一抗為羊抗人的CTGFＣ末端肽抗體(1∶100,Ｒ＆Ｄ公司),兔抗人的p27kip1多克隆抗體(1∶100,NeoMarkers公司)。所形成的復(fù)合物與AEC反
8、應(yīng)后呈紅色陽性并經(jīng)蘇木素復(fù)染固定。每次染色時(shí)均同時(shí)以PBS緩沖液替代一抗作陰性對(duì)照。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件,組間數(shù)據(jù)用ANOVA分析。2結(jié)
