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《紅霉素對(duì)哮喘大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞磷酸化jnk表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、紅霉素對(duì)哮喘大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞磷酸化JNK表達(dá)的影響：吳成云，張近波，李智強(qiáng)，戴元榮【摘要】目的：探討哮喘大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)JNK磷酸化表達(dá)的變化及紅霉素對(duì)其影響。方法：分離培養(yǎng)正常對(duì)照組、哮喘組、紅霉素處理組大鼠的PBMCs。分別采用ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-4，IL-5濃度，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、CsJNKmRNA、磷酸化JNK的表達(dá)。結(jié)果：哮喘組PBMCsJNK磷酸化蛋白、mRNA表達(dá)水平及細(xì)胞上清液中IL-4，IL-5的濃度較正常對(duì)照組顯著升高(P<0.05)，紅霉素處理組
2、JNKmRNA、磷酸化蛋白表達(dá)水平及細(xì)胞上清液中IL-4，IL-5的濃度較哮喘組顯著降低(P<0.05)。通過(guò)直線相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，PBMCsJNK磷酸化蛋白與細(xì)胞上清液中IL-4，IL-5的表達(dá)水平之間均呈顯著正相關(guān)(r分別為0.74和0.66，P均<0.05)。結(jié)論：JNK可能參與支氣管哮喘的病理生理過(guò)程。紅霉素可能通過(guò)作用于JNK這一靶點(diǎn)發(fā)揮其抗炎效應(yīng)?！娟P(guān)鍵詞】支氣管哮喘;外周血單個(gè)核細(xì)胞;JNK蛋白激酶;紅霉素 Abstract:Objective:Tostudythechangesoftheexpressi
3、onofJNKmitogen-activatedproteinkinase(JNK-MAPK)inperipheralbloodmononuclearcells(PBMCs)inratsaandtheeffectsoferythromycinonit.Methods:PBMCsratsa，normalsubjectsanderythromycin-treatedgroup.ThelevelsofproteinofIL-4，IL-5inplasma，JNKmRNAandproteinofJNKinPBMCselinkedimmun
4、osorbentassay(ELISA)，reversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT-PCR)andRNA、phosphor-JNKinPBMCsandtheconcentrationofIL-4，IL-5insupernatantsaticgroupthanthoseinnormalgroup(P<0.05).Byerythromycintreated，theaboveindexesaticgroup(P<0.05).Thereayplayaroleinpathop
5、hysiologicalprocessofasthma.Erythromycincaneffectivelytreatasthmathroughinhibitingtheexpressionofp-JNK. Keya;peripheralbloodmononuclearcells;JNKmitogen-activated proteinkinase;erythromycin 支氣管哮喘是多種炎性細(xì)胞和細(xì)胞因子參與的氣道慢性炎癥。炎癥學(xué)說(shuō)的確立，給哮喘的防治和研究帶來(lái)了很大的進(jìn)展。已有的研究發(fā)現(xiàn)，淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞及其產(chǎn)生的
6、多種細(xì)胞因子(IL-4和IL-5等)和炎癥遞質(zhì)參與了哮喘的發(fā)病過(guò)程[1]。以紅毒素、羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素等為代表的14環(huán)、15環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素對(duì)支氣管哮喘有較好的治療作用，可以改善哮喘患者的臨床癥狀，降低氣道高反應(yīng)性。然而其確切的作用機(jī)制尚未明確，有文獻(xiàn)表明，其抗哮喘作用可能與非抗菌性抗炎作用有關(guān)[2-3]。但有關(guān)紅霉素對(duì)哮喘患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)JNK表達(dá)的影響目前尚未見(jiàn)報(bào)道，本研究通過(guò)復(fù)制卵白蛋白(OVA)致敏的哮喘大鼠模型，探討紅霉素對(duì)哮喘大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞JNK表達(dá)的影響?！ ?材料和方法 1.
7、1材料OVA(Sigma公司);乳糖酸紅霉素(大連美羅制藥公司);磷酸化JNK和JNK多克隆抗體(SantaCruz公司);Cs分離、培養(yǎng)無(wú)菌抽取肝素(30U/mL)抗凝大鼠下腔靜脈血5mL，以淋巴細(xì)胞分離液分離PBMCs。離心洗滌后，用RPMI-1640培養(yǎng)基調(diào)細(xì)胞濃度為1×106/L，培養(yǎng)體系中加刺激物PHA10μg/mL，接種于6孔培養(yǎng)板內(nèi)，相應(yīng)分為正常對(duì)照組、哮喘組和紅霉素處理組(即加入終濃度為15μg/mL的紅霉素共同培養(yǎng))。置于5%CO2、37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h，收集細(xì)胞和細(xì)胞上清液備用，-70℃保存?！ ?.4培
8、養(yǎng)上清中IL-4和IL-5測(cè)定采用ELISA法檢測(cè)各組培養(yǎng)上清液中IL-4和IL-5的表達(dá)水平，操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。 1.5PBMCs中JNKmRNA檢測(cè)JNK上游引物為：5’-CCAGATTGGATATTTCCGTCAG-3’，下游引物：5’-TTCCC
