核酸的分離純化及性質(zhì)研究201603

《核酸的分離純化及性質(zhì)研究201603》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、核酸的分離純化及性質(zhì)研究201603核酸的分離純化及其性質(zhì)研究摘要：提取植物組織DNA和動(dòng)物肝臟的DNA，先要研磨動(dòng)植物組織得到研磨液，然后通過(guò)離心獲得沉淀,分離出脫氧核糖蛋白（DNP）。利用陰離子除垢劑（SDS），將蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)來(lái)，再用氯仿-異戊醇使蛋白質(zhì)變性，然后離心除去變性蛋白質(zhì)，之后用乙醇將DNA沉淀出來(lái)，得到粗DNA。為了獲得高純度的DNA，采用適量的RNase處理提取液來(lái)降解DNA中殘留的RNA，再利用乙醇來(lái)提取DNA，重復(fù)多次來(lái)獲得較純的DNA。再利用DNA紫外吸收特性測(cè)定DNA的純度，發(fā)現(xiàn)提取出來(lái)的DNA純度還有待

2、提高。利用二苯胺法測(cè)定DNA的含量，發(fā)現(xiàn)DNA含量偏低，DNA產(chǎn)率很低。最后采用瓊脂糖凝膠電泳來(lái)分離DNA，測(cè)定DNA片段的分子質(zhì)量，結(jié)果實(shí)驗(yàn)成功的在紫外線下觀察出了標(biāo)準(zhǔn)DNA條帶以及待測(cè)樣品條帶。Abstract:InordertoextractDNAfromplanttissuesandanimalliver,weneedbreakthecelltogainlappingliquidfirst,thenseparatetheDNPbycentrifuging.UsetheSDStobreakproteinandDNA.Phenol-c

3、hloroform-isoamylalcoholMixturecanmakeproteindenaturation,thenremovethedenaturatedproteinbycentrifuging.Then,taketheDNAdipintoethylalcohol,itcanseparatetheDNA.InordertoobtainhighpurityDNA,usetherightamountofRNasetodisassembleresidualRNA,recycledethanoltoextractDNAoverando

4、veragain.UsingultravioletabsorptioncharacteristicsdeterminethepurityofDNA.wefoundthatthepurityofDNAishigh.DiphenylamineisusedtocheckthecontentofDNA,thediscoveryofDNA’scontentislow.DNA’syieldisverylow.Finally,agarosegelelectrophoresisusedtoseparateDNAandcheckmolecularweigh

5、tofDNAfragments.Undertheuvlight,wefoundstandardDNAbandingandthebandingwhichbelongtopendingtextsamplesuccessfully.關(guān)鍵詞：核酸分離純化紫外吸收二苯胺瓊脂糖凝膠電泳前言：核酸（nucleicacid）是遺傳信息的攜帶者，是基因表達(dá)的物質(zhì)基礎(chǔ)。核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質(zhì)之一。核酸廣泛存在于所有動(dòng)植物細(xì)胞微生物體內(nèi)，生物體內(nèi)的核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。無(wú)論是進(jìn)行核酸結(jié)構(gòu)，還是功能研究，首先需要對(duì)

6、核酸進(jìn)行分離和純化。目前,人們已發(fā)現(xiàn),除了遺傳學(xué)上的用途外,核酸制劑還可廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、食品工業(yè)上，核酸及其衍生物具有有效的抗癌作用。所以核酸的分離純化，一直廣受大家的關(guān)注，本次試驗(yàn)就是以植物和動(dòng)物作為實(shí)驗(yàn)材料，來(lái)進(jìn)行核酸的分理純化及性質(zhì)研究。實(shí)驗(yàn)原理1，植物組織中DNA的分離和純化原理DNA存在于細(xì)胞核中，天然狀態(tài)的DNA絕大多數(shù)是以脫氧核糖核蛋白的形式存在，從細(xì)胞中提取DNA時(shí)，一般先獲得脫氧核糖核蛋白（DNP），在將蛋白質(zhì)除去。陰離子去垢劑SDS可使DNA與蛋白質(zhì)分離，再用含少量異戊醇的氯仿去蛋白質(zhì)，最后用乙醇把DNA從抽提液中沉淀

7、出來(lái)。DNP與核糖核蛋白（RNP）在不同濃度的電解質(zhì)溶液中溶解度差別很大，利用這一特性可將二者分離。以NACL為例：RNP在0.14mol/LNACL中溶解度很大，而DNP在其中的溶解度僅為純水中的1%；當(dāng)NACL濃度逐漸增大時(shí)，RNP的溶解度變化不大，而DNP的溶解度則隨之增加；當(dāng)NACL的濃度為1mol/L時(shí)，DNP的溶解度最大，為純水中溶解度的2倍，因此通?？捎?mol/LNACL提取DNA。進(jìn)一步制備高純度的DNA,可用適量的RNase處理提取液，以降解DNA中摻雜的RNA.為了防止提取過(guò)程中DNA被細(xì)胞中釋放出來(lái)的DNase降解

8、以及DNA變性，整個(gè)提取過(guò)程應(yīng)該在低溫度下進(jìn)行，同時(shí)可在研磨緩沖液中加檸檬酸三鈉和Na2-EDTA抑制DNase的活性。提取的DNA是否為純凈，雙鏈，高分子化合物，一般要通過(guò)紫外吸收，化學(xué)測(cè)定