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1、四君子湯中活性成分的提取工藝研究陳常榮王恒黔南民族醫(yī)學高等?？茖W校，貴州都勻558003【摘要】目的優(yōu)選四君子湯中活性成分的提取工藝。方法以四君子湯中人參皂苷、多糖得率為評價指標，分別采用高效液相色譜法、苯酚-硫酸比色法測定人參皂苷和多糖含量，并采用綜合評分的方式利用正交設計法優(yōu)選最佳提取工藝。結果除提取次數(shù)外，影響四君子湯中活性成分提取的因素依次為液固比、提取溫度和提取時間。結論最佳工藝參數(shù)為液固比12:1,提取溫度95°C,提取時間2h,提取2次?！娟P鍵詞】：四君子湯；活性成分；高效液相色譜法；苯酚-硫酸比色法；正交設計法；提取工藝四君子湯是治療脾肺氣虛的經(jīng)典名方，始見
2、于宋代《太平惠民和劑局方》，由人參10g、白術9g、茯苓9g、甘草6g組成。研究文獻表明，方中所含人參皂苷、多糖類成分具有顯著的免疫調(diào)節(jié)、補氣血、抗肝損傷、抗衰老、抗氧化、抗病毒等［1-4］作用，可視為處方的主要活性成分?，F(xiàn)有的提取工藝研究均以單一活性成分作為評價指標，難以反映其所體現(xiàn)的整體效應。木實驗以人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbl和多糖得率作為評價指標，采用高效液相色譜法、苯酚一硫酸比色法分別測定人參皂苷和多糖含量，并采用綜合評分的方式利用正交設計法優(yōu)化其提取工藝，綜合評價復方的內(nèi)在質量，優(yōu)選的提取工藝可為四君子湯的制劑牛.產(chǎn)及臨床應用研究提供實驗性理論基
3、礎。1儀器和試藥1.1儀器：Agilentl200型高效液相色譜儀及色譜工作站（美國Agilent公司）；TU1800S型紫外分光光度儀（北京普析通用儀器有限責任公司）；MettlerAE240電子天平（瑞士）；電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械三廠）；DHG-9240A真空干燥箱（上海金山）；2.0R大容量低速離心機（德國）。1.2試藥：人參皂苛Rgl（中國藥品生物制品檢定所，批號：110703-201027），人參皂苷Rbl（中國藥品生物制品檢定所，批號：110704-200912），人參皂苷Re（中國藥品生物制品檢定所，批號：110754-200822），葡萄糖標準品（中國
4、藥品生物制品檢定所，批號：110833-200503），甲醇（色譜純），水（超純水），蘇他試劑均為分析純，藥材飲片購自貴州省同濟堂，經(jīng)按照2010版中國藥典一部相應藥材項下內(nèi)容鑒定為正品。2方法與結果2.1實驗樣品的制備：按四君子湯處方（人參10g、白術9g、茯苓9g、甘草6g＞稱取藥材飲片34g，按正交設計表安排實驗，加水提取，合并提取液，離心5min（2×103r•min-l）,分取上清液，Sevag法［5］除去蛋白，濃縮，放冷，轉移置200mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得，并按下述方法進行測定。2.2人參皂苷含量測定2.2.1色譜條件：Pr
5、omosilC18色譜柱（5μm,4.6x250mm）；檢測波長為203nm。以乙腈為流動相A,以水為流動相B，進行梯度洗脫：0-35min:19%A（81%B）；35-55min:19%A→29%A（81%B→71%B）；55-70min:29%A（71%B）；70-100min:29%A→40%A（71%B→60%B）；流速ImL/min；柱溫25°C;進樣量10μL;理論板數(shù)按人參皂苷Rgl，峰計算應不低于6000。2.2.2對照品溶液制備：精密稱取人參皂苷Rgl、Re、Rbl對照品適量，加甲醇制成每ImL含Rgl0
6、.205mg、Re0.212mg、Rbl0.266mg的混合對照品溶液，搖勻，即得。2.2.3供試品含量測定：分別精密吸取人參皂苷對照品溶液、供試品溶液各10μL注入色譜儀，測定，即得。2.3多糖含量測定［6］2.3.1對照溶液的制備:精密稱取105°C干燥恒重的標準葡萄糖約20mg,精密稱定，置100mL量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻后即得濃度為0.2mg•mL-l的標準葡萄糖溶液。2.3.2標準曲線的制備：精密吸取濃度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL對照品溶液各2mL置25mL刻度試管中，加入5%苯酚溶液l.OOmL,搖勻，迅速滴加濃硫酸5
7、.00mL,加水至總體積10mL,搖勻，靜置5min，置沸水浴中加熱15min,再置冷水浴中l(wèi)Omin，補充失去的水分至刻度。以2mL蒸餾水同法操作作為空白對照，在490nm處測定吸光度。以濃度（X）為橫坐標，吸光度（丫）為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程為:Y=0.0048+16.45X,（r=0.9997,n=6）。實驗結果表明，多糖含量以葡萄糖計，在0.02025?0.10147mg范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性。2.3.3供試溶液的制備：精密吸取“2.1”項下樣品溶液2mL,加入8mL無水乙醇，混勻，離心5min（
