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《四君子湯中活性成分的提取工藝研究》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、四君子湯中活性成分的提取工藝研究陳常榮王恒黔南民族醫(yī)學高等專科學校,貴州都勻558003【摘要】目的優(yōu)選四君子湯中活性成分的提取工藝。方法以四君子湯中人參皂苷、多糖得率為評價指標,分別采用高效液相色譜法、苯酚-硫酸比色法測定人參皂苷和多糖含量,并采用綜合評分的方式利用正交設計法優(yōu)選最佳提取工藝。結果除提取次數(shù)外,影響四君子湯中活性成分提取的因素依次為液固比、提取溫度和提取時間。結論最佳工藝參數(shù)為液固比12:1,提取溫度95°C,提取時間2h,提取2次?!娟P鍵詞】:四君子湯;活性成分;高效液相色譜法;苯酚-硫酸比色法;正交設計法;提取工藝四君子湯是治療脾肺氣虛的經(jīng)典名方,始見
2、于宋代《太平惠民和劑局方》,由人參10g、白術9g、茯苓9g、甘草6g組成。研究文獻表明,方中所含人參皂苷、多糖類成分具有顯著的免疫調(diào)節(jié)、補氣血、抗肝損傷、抗衰老、抗氧化、抗病毒等[1-4]作用,可視為處方的主要活性成分。現(xiàn)有的提取工藝研究均以單一活性成分作為評價指標,難以反映其所體現(xiàn)的整體效應。木實驗以人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbl和多糖得率作為評價指標,采用高效液相色譜法、苯酚一硫酸比色法分別測定人參皂苷和多糖含量,并采用綜合評分的方式利用正交設計法優(yōu)化其提取工藝,綜合評價復方的內(nèi)在質(zhì)量,優(yōu)選的提取工藝可為四君子湯的制劑牛.產(chǎn)及臨床應用研究提供實驗性理論基
3、礎。1儀器和試藥1.1儀器:Agilentl200型高效液相色譜儀及色譜工作站(美國Agilent公司);TU1800S型紫外分光光度儀(北京普析通用儀器有限責任公司);MettlerAE240電子天平(瑞士);電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械三廠);DHG-9240A真空干燥箱(上海金山);2.0R大容量低速離心機(德國)。1.2試藥:人參皂苛Rgl(中國藥品生物制品檢定所,批號:110703-201027),人參皂苷Rbl(中國藥品生物制品檢定所,批號:110704-200912),人參皂苷Re(中國藥品生物制品檢定所,批號:110754-200822),葡萄糖標準品(中國
4、藥品生物制品檢定所,批號:110833-200503),甲醇(色譜純),水(超純水),蘇他試劑均為分析純,藥材飲片購自貴州省同濟堂,經(jīng)按照2010版中國藥典一部相應藥材項下內(nèi)容鑒定為正品。2方法與結果2.1實驗樣品的制備:按四君子湯處方(人參10g、白術9g、茯苓9g、甘草6g>稱取藥材飲片34g,按正交設計表安排實驗,加水提取,合并提取液,離心5min(2×103r•min-l),分取上清液,Sevag法[5]除去蛋白,濃縮,放冷,轉移置200mL量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,即得,并按下述方法進行測定。2.2人參皂苷含量測定2.2.1色譜條件:Pr
5、omosilC18色譜柱(5μm,4.6x250mm);檢測波長為203nm。以乙腈為流動相A,以水為流動相B,進行梯度洗脫:0-35min:19%A(81%B);35-55min:19%A→29%A(81%B→71%B);55-70min:29%A(71%B);70-100min:29%A→40%A(71%B→60%B);流速ImL/min;柱溫25°C;進樣量10μL;理論板數(shù)按人參皂苷Rgl,峰計算應不低于6000。2.2.2對照品溶液制備:精密稱取人參皂苷Rgl、Re、Rbl對照品適量,加甲醇制成每ImL含Rgl0
6、.205mg、Re0.212mg、Rbl0.266mg的混合對照品溶液,搖勻,即得。2.2.3供試品含量測定:分別精密吸取人參皂苷對照品溶液、供試品溶液各10μL注入色譜儀,測定,即得。2.3多糖含量測定[6]2.3.1對照溶液的制備:精密稱取105°C干燥恒重的標準葡萄糖約20mg,精密稱定,置100mL量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度,搖勻后即得濃度為0.2mg•mL-l的標準葡萄糖溶液。2.3.2標準曲線的制備:精密吸取濃度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL對照品溶液各2mL置25mL刻度試管中,加入5%苯酚溶液l.OOmL,搖勻,迅速滴加濃硫酸5
7、.00mL,加水至總體積10mL,搖勻,靜置5min,置沸水浴中加熱15min,再置冷水浴中l(wèi)Omin,補充失去的水分至刻度。以2mL蒸餾水同法操作作為空白對照,在490nm處測定吸光度。以濃度(X)為橫坐標,吸光度(丫)為縱坐標,繪制標準曲線,回歸方程為:Y=0.0048+16.45X,(r=0.9997,n=6)。實驗結果表明,多糖含量以葡萄糖計,在0.02025?0.10147mg范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性。2.3.3供試溶液的制備:精密吸取“2.1”項下樣品溶液2mL,加入8mL無水乙醇,混勻,離心5min(