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1、黃芪注射液對雌激素受體的激活作用研究作者：王海彬，王軍艦，黃輝，劉琳，劉少軍，徐傳毅，何偉，樊粵光，黃志偉【關(guān)鍵詞】黃芪注射液；,,基因報告系統(tǒng)；,,雌激素受體；,,HeLa細胞；,,配體結(jié)合域 摘要：目的構(gòu)建含有雌激素受體配體結(jié)合域的哺乳動物細胞雜交基因報告系統(tǒng)，研究黃芪注射液對雌激素受體（ER）活性的影響。方法PCR擴增雌激素受體配體結(jié)合域，將配體結(jié)合域克隆到真核表達質(zhì)粒pCMV-BD構(gòu)建細胞雜交基因報告系統(tǒng),研究黃芪注射液與雌激素受體的關(guān)系；MTT法檢測黃芪注射液對細胞活力的影響。結(jié)果成功構(gòu)建含有
2、雌激素受體配體結(jié)合域的哺乳動物細胞雜交基因報告系統(tǒng)，黃芪注射液不能提高細胞活性，但對雌激素受體具有激活作用。結(jié)論黃芪注射液可能通過雌激素受體發(fā)揮療效，細胞雜交基因報告系統(tǒng)是研究中藥作用機理的手段之一?！ ￡P(guān)鍵詞：黃芪注射液；基因報告系統(tǒng)；雌激素受體；HeLa細胞；配體結(jié)合域 ActivatingEffectofAstragalusInjectiononEstrogenReceptor Abstract:ObjectiveToestablishtheGal4DBD-ERorERLBDreportsyst
3、emtostudytheeffectofAstragalusInjectiononERs.MethodsGenereportsystemplifyingtheligandbindingdomain(LBD)eraseandsubcloningtheproductintotheeukaryoticexpressionvectorpCMVBD.ThissystemployedtostudytherelationshipbetusingER-LBDisestablished.AstragalusInjectio
4、ncannotimprovecellactivitybutcanactivateERsactivation.ConclusionThemechanismsofAstragalusInjectionmayberelatedtoitseffectofactivatingERs.GenereportsystemcanbeusedtostudythemechanismsofChinesetraditionalmedicine. Key；Estrogenreceptor；HeLacell；Ligandbindin
5、gdomain 雌激素受體（Estrogenreceptor,ER）是一個核轉(zhuǎn)錄因子,屬甾體激素受體家族成員，調(diào)控基因表達。ER在1967年被首次發(fā)現(xiàn)［1］，20多年來,它作為內(nèi)分泌治療的預測因子被廣泛應(yīng)用。1996年ERα首次從大鼠中克?。?］，其后人和小鼠也相繼發(fā)現(xiàn)ERβ的表達［3，4］。ERα和ERβ的結(jié)構(gòu)、功能存在差異,在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮不同作用［5］。因而研究藥物對雌激素受體的作用，將有利于我們認識藥物的作用機理。黃芪主要有補氣的作用,在臨床上主要治療以氣虛為主證的疾病，在處方中多以君藥
6、出現(xiàn),具有補中益氣、補氣升陽、益衛(wèi)固表的作用。為了進一步探討其作用機理，本研究采用哺乳動物細胞雜交技術(shù)研究黃芪注射液對雌激素受體配體結(jié)合域的作用，探討黃芪對雌激素受體的部分作用?！ ?材料與方法 1.1材料Hela細胞由中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院裴端卿研究員贈送；DMEM無血清、無酚紅培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素和鏈霉素購自Hyclone公司；Lipofactemine2000購自Invitrogen公司；SteadyGlo熒光檢測試劑盒購自Promega公司；細胞培養(yǎng)板均購自CorningCost
7、ar公司；MTT購自Molecular公司；黃芪注射液(上海禾豐藥業(yè))?！ ?.2PCR擴增hERa-LBDcDNA 根據(jù)genebank報道的ERs序列（M12674和NM001437），設(shè)計hERa-LBD和hERb-LBDcDNA序列的引物,在5’端引入一個BamHⅠ的酶切位點,在hERa-LBD的3’端引入一個EcoRⅠ的酶切位點，在hERb-LBD的3’端引入一個HindⅢ的酶切位點，引物序列如下。上游5’GCGGATCCGGAGGGAGAATGTTGAAAC3’下游 5’GCGAATTCTC
8、AGACTGTGGCAGGGAAAC3’；HumanERβLBD引物序列：上游5’GCGGATCCGGCAAGGCCAAGAGAAGTG3’下游5’ GCAAGCTTTCACTGAGACTGTGGGTTC3’。以cmxp-ERa和cmxp-ERb全長cDNA質(zhì)粒為模板進行PCR反應(yīng)。反應(yīng)程序為：94℃,5min；94℃，1min；55℃，1min；72℃，2min；72℃，7min循環(huán)20次；PCR產(chǎn)物進行1%瓊脂糖凝膠電泳,
