資源描述：
《丙型肝炎病毒抗體試劑檢測結果的可信度分析.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、我國丙型肝炎病毒核酸擴增熒光定量試劑盒檢測值的標準化饒慧瑛魏來季穎朱凌作者單位：100044，北京大學人民醫(yī)院，北京大學肝病研究所*通訊作者：魏來，地址：北京市西城區(qū)西直門南大街11號，北京大學人民醫(yī)院肝病研究所，100044，電話：（010）88325566，Email：weilai@pkuph.edu.cn【摘要】 目的 確定我國國家食品藥品監(jiān)督管理局批準上市銷售的國內(nèi)丙型肝炎病毒核酸（HCVRNA）擴增熒光定量試劑的檢測值（單位：拷貝/ml）與樣品的真值（單位：IU/ml）之間的換算公式，為HCV感染的臨床診斷和治療監(jiān)測提供統(tǒng)一的HCVRNA載量檢測標準。材料和方法用人AB型血清將
2、WHO第二代HCVRNA國際標準品（編號:96/798）配制成不同濃度的樣品7份，7份樣品的濃度分別為100000、50000、25000、10000、5000、2500、1000（IU/ml）。采用國內(nèi)3種HCVRNA熒光定量試劑的2個不同的批次檢測這9份不同濃度范圍的標準品，每個批次重復測定4次。檢測方法采用實時熒光定量聚合酶鏈反應方法。結果HCVRNA熒光定量試劑A的檢測值（X）與樣品的真值（Y）之間的關系為：Y＝0.75X-1366，r2＝0.99；試劑B的檢測值（X）與樣品的真值（Y）之間的關系為：Y＝0.93X＋1244，r2＝0.99；試劑C的檢測值（X）與樣品的真值（Y）
3、之間的關系為：Y＝0.49X＋2180，r2＝0.99。結論 根據(jù)3種不同試劑的檢測值與真值之間的換算公式，能將檢測值初步標準化，使不同試劑的檢測值之間具有可比性，為HCV感染的臨床診斷和治療監(jiān)測提供統(tǒng)一的HCVRNA載量檢測標準?！娟P鍵詞】 丙型肝炎病毒；核酸；熒光定量試劑盒；標準化丙型肝炎是一種主要經(jīng)血液傳播的傳染病，丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus,HCV）感染可導致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝細胞肝癌。目前，全球超過1.7億人為慢性HCV感染者[1-3]。我國HCV感染的標化流行率約為3.2%，屬于國際范圍內(nèi)的高流行區(qū)[4]，對于我國HCV感
4、染的預防控制、流行病學監(jiān)測、治療效果必須給予高度的重視。因此，我們需建立HCV的標準化檢測。8HCV核酸擴增定量檢測是復雜的生物學測定，核酸擴增檢測結果報告的單位有很多種,如當量/ml、拷貝/ml、PCR檢測單位/ml等等，不同實驗室不同試劑之間結果很難進行比較。為了解決這個問題，世界衛(wèi)生組織（WorldHealthOrganization,WHO）于1996年組織多中心合作研制了用于病毒核酸擴增檢測的HCVRNA國際標準品[5-7]，單位為國際單位/ml（IU/ml）。目前，我國已有幾百家臨床實驗室進行HCV核酸的PCR定量檢測，均采用國產(chǎn)試劑盒，但由于缺乏統(tǒng)一的標準，結果之間沒有可比
5、性。因此，亟待解決我國HCVRNA臨床定量檢測的標準化問題。本研究擬以英國國家生物制品及標準化控制研究所研制的WHO第二代HCVRNA國際標準品為參照，對目前我國國內(nèi)上市銷售的3種HCVRNA擴增熒光定量試劑盒進行標準化，確定各種試劑的檢測值（單位：拷貝/ml）與樣品的真值（單位：IU/ml）之間的換算公式，為HCV感染的臨床診斷和治療監(jiān)測提供統(tǒng)一的HCVRNA載量檢測標準，規(guī)范我國HCVRNA熒光定量檢測試劑，為其與國際標準接軌奠定基礎。材料和方法一、材料1.HCVRNA的WHO國際標準品：購自英國國家生物制品及標準化控制研究所（NationalInstituteforBiologic
6、alStandardsandControl,NIBSC），編號：96/798，濃度105IU/ml，每支0.5ml。保存于－80℃,用不含核糖核酸酶的滅菌雙蒸水4℃復溶后使用。2.稀釋用陰性血清：乙肝表面抗原（HBsAg）、抗-HCV、抗-HIV均為陰性的人AB型血清，購自天津市川貝生化制品有限公司。保存于－80℃,4℃復融后使用。3.HCVRNA熒光定量試劑：3種獲得我國國家食品藥品監(jiān)督管理局（StateFoodandDrugAdministration,SFDA）批準的試劑，3種試劑批號分別為2007001和2007002，20060301和20060901，20061011和200
7、61221。4.儀器：Roche公司的LightCycle熒光定量PCR儀。二、方法1.標準品配制：用人AB型血清將HCVRNA國際標準品配制成不同濃度的樣品7份，7份樣品的濃度分別為100000、50000、25000、10000、5000、2500、1000（IU/ml）。2.檢測方法：分別采用3種HCVRNA熒光定量試劑檢測這7份不同濃度的樣品中的HCVRNA載量。使用3種試劑時，均嚴格按3種試劑的說明書操作及判定結果。3.8
