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《丙型肝炎病毒抗體試劑檢測結(jié)果的可信度分析.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、我國丙型肝炎病毒核酸擴(kuò)增熒光定量試劑盒檢測值的標(biāo)準(zhǔn)化饒慧瑛魏來季穎朱凌作者單位：100044，北京大學(xué)人民醫(yī)院，北京大學(xué)肝病研究所*通訊作者：魏來，地址：北京市西城區(qū)西直門南大街11號(hào)，北京大學(xué)人民醫(yī)院肝病研究所，100044，電話：（010）88325566，Email：weilai@pkuph.edu.cn【摘要】 目的 確定我國國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)上市銷售的國內(nèi)丙型肝炎病毒核酸（HCVRNA）擴(kuò)增熒光定量試劑的檢測值（單位：拷貝/ml）與樣品的真值（單位：IU/ml）之間的換算公式，為HCV感染的臨床診斷和治療監(jiān)測提供統(tǒng)一的HCVRNA載量檢測標(biāo)準(zhǔn)。材料和方法用人AB型血清將
2、WHO第二代HCVRNA國際標(biāo)準(zhǔn)品（編號(hào):96/798）配制成不同濃度的樣品7份，7份樣品的濃度分別為100000、50000、25000、10000、5000、2500、1000（IU/ml）。采用國內(nèi)3種HCVRNA熒光定量試劑的2個(gè)不同的批次檢測這9份不同濃度范圍的標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)批次重復(fù)測定4次。檢測方法采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)方法。結(jié)果HCVRNA熒光定量試劑A的檢測值（X）與樣品的真值（Y）之間的關(guān)系為：Y＝0.75X-1366，r2＝0.99；試劑B的檢測值（X）與樣品的真值（Y）之間的關(guān)系為：Y＝0.93X＋1244，r2＝0.99；試劑C的檢測值（X）與樣品的真值（Y）
3、之間的關(guān)系為：Y＝0.49X＋2180，r2＝0.99。結(jié)論 根據(jù)3種不同試劑的檢測值與真值之間的換算公式，能將檢測值初步標(biāo)準(zhǔn)化，使不同試劑的檢測值之間具有可比性，為HCV感染的臨床診斷和治療監(jiān)測提供統(tǒng)一的HCVRNA載量檢測標(biāo)準(zhǔn)?！娟P(guān)鍵詞】 丙型肝炎病毒；核酸；熒光定量試劑盒；標(biāo)準(zhǔn)化丙型肝炎是一種主要經(jīng)血液傳播的傳染病，丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus,HCV）感染可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝細(xì)胞肝癌。目前，全球超過1.7億人為慢性HCV感染者[1-3]。我國HCV感染的標(biāo)化流行率約為3.2%，屬于國際范圍內(nèi)的高流行區(qū)[4]，對(duì)于我國HCV感
4、染的預(yù)防控制、流行病學(xué)監(jiān)測、治療效果必須給予高度的重視。因此，我們需建立HCV的標(biāo)準(zhǔn)化檢測。8HCV核酸擴(kuò)增定量檢測是復(fù)雜的生物學(xué)測定，核酸擴(kuò)增檢測結(jié)果報(bào)告的單位有很多種,如當(dāng)量/ml、拷貝/ml、PCR檢測單位/ml等等，不同實(shí)驗(yàn)室不同試劑之間結(jié)果很難進(jìn)行比較。為了解決這個(gè)問題，世界衛(wèi)生組織（WorldHealthOrganization,WHO）于1996年組織多中心合作研制了用于病毒核酸擴(kuò)增檢測的HCVRNA國際標(biāo)準(zhǔn)品[5-7]，單位為國際單位/ml（IU/ml）。目前，我國已有幾百家臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行HCV核酸的PCR定量檢測，均采用國產(chǎn)試劑盒，但由于缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果之間沒有可比
5、性。因此，亟待解決我國HCVRNA臨床定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)化問題。本研究擬以英國國家生物制品及標(biāo)準(zhǔn)化控制研究所研制的WHO第二代HCVRNA國際標(biāo)準(zhǔn)品為參照，對(duì)目前我國國內(nèi)上市銷售的3種HCVRNA擴(kuò)增熒光定量試劑盒進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，確定各種試劑的檢測值（單位：拷貝/ml）與樣品的真值（單位：IU/ml）之間的換算公式，為HCV感染的臨床診斷和治療監(jiān)測提供統(tǒng)一的HCVRNA載量檢測標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范我國HCVRNA熒光定量檢測試劑，為其與國際標(biāo)準(zhǔn)接軌奠定基礎(chǔ)。材料和方法一、材料1.HCVRNA的WHO國際標(biāo)準(zhǔn)品：購自英國國家生物制品及標(biāo)準(zhǔn)化控制研究所（NationalInstituteforBiologic
6、alStandardsandControl,NIBSC），編號(hào)：96/798，濃度105IU/ml，每支0.5ml。保存于－80℃,用不含核糖核酸酶的滅菌雙蒸水4℃復(fù)溶后使用。2.稀釋用陰性血清：乙肝表面抗原（HBsAg）、抗-HCV、抗-HIV均為陰性的人AB型血清，購自天津市川貝生化制品有限公司。保存于－80℃,4℃復(fù)融后使用。3.HCVRNA熒光定量試劑：3種獲得我國國家食品藥品監(jiān)督管理局（StateFoodandDrugAdministration,SFDA）批準(zhǔn)的試劑，3種試劑批號(hào)分別為2007001和2007002，20060301和20060901，20061011和200
7、61221。4.儀器：Roche公司的LightCycle熒光定量PCR儀。二、方法1.標(biāo)準(zhǔn)品配制：用人AB型血清將HCVRNA國際標(biāo)準(zhǔn)品配制成不同濃度的樣品7份，7份樣品的濃度分別為100000、50000、25000、10000、5000、2500、1000（IU/ml）。2.檢測方法：分別采用3種HCVRNA熒光定量試劑檢測這7份不同濃度的樣品中的HCVRNA載量。使用3種試劑時(shí)，均嚴(yán)格按3種試劑的說明書操作及判定結(jié)果。3.8
