萊菔硫烷對(duì)涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞系acc-m增殖和凋亡的影響

《萊菔硫烷對(duì)涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞系acc-m增殖和凋亡的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文萊菔硫烷對(duì)涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC--M增殖和凋亡的影響姓名：莊志征申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：張英懷；賈志宇201203中文摘要萊菔硫烷對(duì)涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC．M增殖和凋亡的影響摘要目的：涎腺腺樣囊性癌(salivaryadenoidcysticcarcinoma，SACC)作為一種最常見的惡性腫瘤，以極強(qiáng)的浸潤(rùn)性和高遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率為重要特征，發(fā)病率在口腔頜面部惡性腫瘤中居第二位。目前臨床治療手段以手術(shù)切除治療為主，但手術(shù)切除后也常有局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，其遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移率在口腔頜面部居首位。涎腺腺樣囊性

2、癌的發(fā)病及轉(zhuǎn)移機(jī)制目前仍不清楚。因此探索新的治療方法，以提高對(duì)腺樣囊性癌的療效，減少局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生，改善患者的生存質(zhì)量顯得尤為必要。萊菔硫烷(sulforaphane，SFN)是主要從十字花科蔬菜中提取的一種具強(qiáng)抗癌作用的植物化學(xué)活性物質(zhì)，近年來相繼有研究顯示萊菔硫烷及其主要成分具有抗腫瘤的作用，但萊菔硫烷是否有誘導(dǎo)人腺樣囊性癌細(xì)胞凋亡的作用，國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道。本研究擬對(duì)體外培養(yǎng)的人涎腺腺樣囊性癌ACC．M細(xì)胞經(jīng)不同濃度、不同時(shí)間萊菔硫烷作用后，觀察不同濃度、不同作用時(shí)間下萊菔硫烷對(duì)人涎腺腺樣囊性癌ACC．M細(xì)胞系是否具有抑制其增殖和

3、誘導(dǎo)其凋亡的作用，探討其可能的分子作用機(jī)制，旨在為腺樣囊性癌的多模式治療中拓展新的植物化學(xué)藥物治療提供實(shí)驗(yàn)資料。方法：1材料1．1ACC．M：上海交通大學(xué)口腔頜面外科實(shí)驗(yàn)室提供，建立于1995年；1．2萊菔硫烷(SFN)：購(gòu)自美國(guó)LKT實(shí)驗(yàn)室，純度≥98％2方法2．1藥液配制：萊菔硫烷用二甲基亞砜溶解配制成100mmol／L儲(chǔ)存液，使用前用RPMll640培養(yǎng)液稀釋。2．2細(xì)胞培養(yǎng)：培養(yǎng)液采用RPMll640加入10％的胎牛血清和鏈霉素(100lxg／mL)、青霉素(100U／mL)，置37℃、5％C02恒溫恒濕箱培養(yǎng)，約72．96小時(shí)可以傳代

4、。2．3MTT比色試驗(yàn)：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞經(jīng)消化液(O．04％EDTA和0．25％胰蛋白酶(1：1)混合液)消化后制成5．0x104個(gè)／mL細(xì)胞懸液，接種于中文摘要96孔板，每孔1009l，培養(yǎng)24h后，分別加入含萊菔硫烷溶液200I_tl，使各孔藥液終濃度為5州、101AVI、209M、309M、40州、601aM、80rtM、100I^M，并設(shè)對(duì)照組和調(diào)零孔，每組6個(gè)復(fù)孔。置培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，在分別培養(yǎng)24、48、72小時(shí)后，使用微量移液器予每孔加入濃度為Sg／L的MTT溶液20山，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄去上清，予每孔加入2001A二甲基亞砜，于振蕩

5、器上振蕩搖勻約15分鐘，放入酶標(biāo)儀(490nm)測(cè)定各孔吸光度值，重復(fù)三次，取均值計(jì)算生長(zhǎng)抑制率。2．4臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞制成5．0x104個(gè)／mL細(xì)胞懸液，接種于6孔板，每孔3mL，培養(yǎng)24h后，分別加入萊菔硫烷溶液，使終濃度為201JM、401xM，設(shè)對(duì)照組，繼續(xù)培養(yǎng)24、48、72小時(shí)后以臺(tái)盼藍(lán)染液處理，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)分別計(jì)數(shù)各濃度時(shí)間的染色細(xì)胞(即死亡)與未染色細(xì)胞(即活細(xì)胞)的數(shù)量，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2．5倒置相差顯微鏡觀察：制備密度約為5．O×104個(gè)／mL細(xì)胞懸液，于50mL玻璃培養(yǎng)瓶中接種細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)，加藥后分別觀察細(xì)胞

6、在對(duì)照組與含藥培養(yǎng)液中(5州、101．tM、20?vl、301AVI、401aM、60kdVl、80州、1001xM)，各時(shí)間組(24h、48h、72h)的生長(zhǎng)狀況。2．6光鏡觀察：制備密度約為5．O×104個(gè)／mL細(xì)胞懸液，于6孔板中放置玻璃蓋玻片后接種細(xì)胞，置恒溫箱培養(yǎng)，待細(xì)胞爬片成功，加入不含或含藥培養(yǎng)液，分別培養(yǎng)24h、48h、72h后，Giemsa染色，置光鏡下觀察。2．7電鏡觀察：將細(xì)胞接種于50mL培養(yǎng)瓶中貼壁成功后加入空白或濃度為409M的含萊菔硫烷培養(yǎng)液，處理48h后，制備電鏡標(biāo)本，觀察正常與凋亡細(xì)胞的結(jié)構(gòu)差異。2．8流式細(xì)胞

7、術(shù)檢測(cè)：將細(xì)胞接種于50mL培養(yǎng)瓶中貼壁成功后加入空白或含藥培養(yǎng)液，經(jīng)消化，離心，PBS液洗滌后加入Annexin．V-FITC和PI試劑標(biāo)記處理細(xì)胞，置流式細(xì)胞儀檢測(cè)，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。3統(tǒng)計(jì)分析匯總所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)所測(cè)得的數(shù)據(jù)計(jì)算分析。結(jié)果：1MTT比色試驗(yàn)：萊菔硫烷可以顯著抑制ACC—M細(xì)胞的生長(zhǎng)，生長(zhǎng)抑制率最大值高達(dá)81．05％。經(jīng)計(jì)算，在同一處理時(shí)間的情況，含藥組各濃度的生長(zhǎng)抑制率不同(尸

8、正相關(guān)關(guān)系。2臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)：用藥組的活細(xì)胞比率隨用藥濃度和時(shí)間的增長(zhǎng)呈明顯下降趨勢(shì)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各時(shí)間組和各濃度組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異儼<0．01)，