雷替曲塞對(duì)人胃癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響及其機(jī)制的研究

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文雷替曲塞對(duì)人胃癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響及其機(jī)制的研究姓名：李華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：劉巍201203中文摘要雷替曲塞對(duì)人胃癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響及其機(jī)制的研究摘要目的：胃癌是在世界范圍內(nèi)排名第四位的常見(jiàn)惡性腫瘤，每年有100萬(wàn)的新發(fā)病例，其中將近70％發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家。2007年，全球范圍內(nèi)大約有80萬(wàn)人死于胃癌。我國(guó)胃癌平均年死亡率約為25．2／10萬(wàn)人口。5．氟尿嘧啶(5-Fu)在胃癌的化療中應(yīng)用廣泛，常需連續(xù)或持續(xù)靜脈滴注，應(yīng)用不夠方便。埋置中心靜脈導(dǎo)管解決了此問(wèn)題，但埋置中心靜脈導(dǎo)管同時(shí)也增加了護(hù)理

2、和費(fèi)用的問(wèn)題。雷替曲塞(Raltitrexed)是一種喹唑啉葉酸鹽類(lèi)似物，為一種新型的水溶性胸苷酸合成酶(TS)抑制劑。它無(wú)需亞葉酸鈣增效，使用方便。目前雷替曲塞主要應(yīng)用于晚期結(jié)直腸癌患者的治療。在胃癌的研究中，雷替曲塞聯(lián)合其它細(xì)胞毒性藥物的臨床試驗(yàn)顯示是有效的，但尚缺乏大規(guī)模臨床試驗(yàn)證實(shí)。雷替曲塞在胃癌的應(yīng)用上還值得進(jìn)一步研究。本研究擬通過(guò)建立人胃癌細(xì)胞MGC．803裸鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，分別給予雷替曲塞、5．Fu、生理鹽水藥物干預(yù)，初步探索雷替曲塞對(duì)人胃癌裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的影響及其機(jī)制。方法：l、建立人胃癌細(xì)胞MGC．803裸鼠皮下移植瘤

3、模型。2、實(shí)驗(yàn)分組及藥物干預(yù)：將24只成瘤裸鼠模型隨機(jī)分組為雷替曲塞組、5-Fu組、對(duì)照組，每組8只，分別給予裸鼠腹腔注射雷替曲塞(7．5mg／Kg／d)、5-Fu(15mg／Kg／d)、生理鹽水，每只0．2ml，連續(xù)5天，休息2天后，繼續(xù)給藥5天。監(jiān)測(cè)各組裸鼠體重變化，同時(shí)觀察裸鼠精神狀態(tài)、飲食、大便情況。3、評(píng)價(jià)抑瘤作用：每隔3天用游標(biāo)卡尺測(cè)量裸鼠腫瘤長(zhǎng)徑(A)和垂直橫徑(B)，按公式V=AxB2／2計(jì)算裸鼠腫瘤體積，并繪制腫瘤體積增長(zhǎng)曲線。給藥休息2天后，全部裸鼠脫頸椎處死，立即剝離腫瘤，并對(duì)腫瘤進(jìn)行稱(chēng)重，計(jì)算抑瘤率，抑瘤率=(對(duì)照組瘤重．

4、實(shí)驗(yàn)組瘤重)尉照組瘤重*100％。4、流式細(xì)胞儀測(cè)定瘤細(xì)胞的周期分布和凋亡。5、采用RT-PCR、Westernblot印跡法檢測(cè)各組腫瘤p53mRNA及p53蛋白的表達(dá)水平，并比較三組之間的差異。6、統(tǒng)計(jì)分析：采用SPSS13．0軟件對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量數(shù)據(jù)以i士s表示，多組樣本間均數(shù)比較采用單因素方差(One．wayANOVA)分析，P

5、u組裸鼠體重均明顯低于對(duì)照組體重，統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(腳．01)。且5．Fu組裸鼠體重低于雷替曲塞組裸鼠體重(Po．05)。3荷瘤裸鼠瘤重及抑瘤率：雷替曲塞組、5．Fu組和對(duì)照組裸鼠瘤重分別為：0．78+0．069、O．

6、83±O．089、1．534-0．139，雷替曲塞組和5-Fu組裸鼠瘤重均低于對(duì)照組瘤重，統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異儼0．05)。雷替曲塞組和5-Fu組的抑瘤率分別為49．02％、45．75％。4荷瘤裸鼠瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期分布和凋亡：雷替曲塞組和5-Fu組瘤細(xì)胞的G0／G1期比例較對(duì)照組比例明顯減低∽0．01)，而S期比例較對(duì)照組明顯升高儼0．05)。三組G2／S期比例之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>o．05)。三組之間的凋亡率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、。與對(duì)照組的凋亡率相比，雷替曲塞組和5．Fu組的瘤細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組(P<0．01)，而雷替曲塞組的瘤細(xì)胞凋亡率也高于5-Fu組的凋亡率儼《o．05)。5雷替曲塞組中裸鼠腫瘤p53mRNA相對(duì)表達(dá)量為：0．521±O．046；5．Fu組中裸鼠腫瘤p53mRNA相對(duì)表達(dá)量為：0．4874-0．041；對(duì)照組中裸鼠腫瘤p53mRNA相對(duì)表達(dá)量為：0．159±0．025。雷替曲塞組裸鼠腫瘤p53蛋白相對(duì)表達(dá)量為：0．509+0．049；5-Fu組裸鼠腫瘤p53蛋白相對(duì)表達(dá)量為：0．474_-l-0．034；對(duì)照組裸鼠腫瘤p53蛋白相對(duì)表達(dá)量為：O

8、．1934-0．021。與對(duì)照組相比，雷替曲塞組和5．Fu組裸鼠腫瘤p53mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高儼<0．01)，而雷替曲塞組和5