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《兔骨髓間質干細胞的成骨細胞、軟骨細胞分化研究》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、遵義醫(yī)學院碩士學位論文兔骨髓間質干細胞的成骨細胞、軟骨細胞分化研究姓名:黃飛日申請學位級別:碩士專業(yè):外科學指導教師:劉鐸201205遵義醫(yī)學院碩士學位論文中文摘要兔骨髓問充質千細胞的成骨細胞、軟骨細胞分化研究中文摘要目的建立體外分離、培養(yǎng)兔骨髓間充質干細胞(BMSCs)的方法。初步探討B(tài)MSCs可定向分化為成骨細胞、軟骨細胞的途徑。方法抽取家兔骨髓液,.用淋巴細胞分離液梯度離,fl,獲得單個核細胞,經原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng),選擇狀態(tài)良好、經過3次傳代的細胞與原代細胞一起用于下面實驗。(1)誘導BMSCs向成骨細胞轉化:向培養(yǎng)液內加入地塞米松1×100mol/L,t3.磷酸甘油鈉10retool
2、/L,維生素C5099/mL誘導培養(yǎng)后,行堿性磷酸酶活性檢查和Vonkossa染色檢查。(2)向培養(yǎng)基中添加不同質量濃度bFGF,行MTT檢測(3)誘導BMSCs向軟骨細胞轉化:向培養(yǎng)液內加入地塞米松l×10~mol/L、維生素C5099/mL、bFGFlong/mL,培養(yǎng)1周后將bFGF換為TGF.B10ng/mL,繼續(xù)培養(yǎng)3周,行甲苯胺藍染色,RT-PCR技術檢測Ⅱ型膠原和聚集蛋白聚糖的表達。結果(1)經地塞米松、13.磷酸甘油鈉及維生素c誘導培養(yǎng)3.4周后,BMSCs轉化為成骨細胞,實驗組ALP活性明顯高于對照組,Vonkossa染色陽性。(2)10ng/mL的bFGF對BMSCs的促
3、增值能力最強。(3)BMSCs經軟骨誘導分化后骨髓間充質干細胞呈軟骨細胞形態(tài),甲苯胺藍染色陽性,PCR證實轉化前的細胞主要表達I型膠原rnRNA。轉化后的細胞主要表達II型膠原mRNA。II型膠原和聚集蛋白聚糖的表達陽性。結論兔骨髓間充質干細胞可定向分化為成骨細胞、軟骨細胞。關鍵詞骨髓間充質干細胞,誘導培養(yǎng),PCR,軟骨細胞,成骨細胞遵義醫(yī)學院碩士學位論文英文摘要TheresearchingonOsteoblastsandCartilagedifferentiationofrabbitbonemarrowmesenehymalstemcellsAbstructObjectiveToestab
4、lishamethodisolatingandculturingrabbitbonemarrowstromalcells(BMSCs),afavorableconditionsinducingchondrogenicdifferentiationandmakeanartificialcartilaginousexplantsusingthedifferentiatedchondrocytes.Thentorepairthedefectsofrabbitarticularcartilageusingthisexplants.MethodExtractofrabbitbonemarrow3-4m
5、L,usingthelymphocyteseparationmediumtoobtainmononuclearcellsbygradientcentrifugation,primarycultureandsubcultureinvitro.Thefollowingexperimentadoptionprimarycellsandtheplummycellsafterfivepassages.(1)InducingtransformationofBMSCstothereticulodromousinterstitialcell:addingdexamethasone,bFGF,andvitam
6、inCintotheculturemediuminordertoinducingthecelltransformation.(2)InducingtransformationofBMSCstotheosteoblasts:addingdexamethasone,D—glycerophosphatesodiumandvitaminCintotheculturemediuminordertoinducingthecelltransformation,anddetectthedifferencesoftheactivityofalkalinephosphatase.(3)Inducingtrans
7、formationofBMSCstothechondrocytes:Addingdexamethasone,50ug/mlvitaminC,10ng/mLbFGFintotheculturemediumoftheplummyBMSCsafter2-3passagesforoneweek,thenchange10ng/mLbFGFtol0ng/mLTGF-p,andkeeponculturefor3weeks.