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《兔骨髓間質干細胞的成骨細胞、軟骨細胞分化研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、遵義醫(yī)學院碩士學位論文兔骨髓間質干細胞的成骨細胞、軟骨細胞分化研究姓名：黃飛日申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學指導教師：劉鐸201205遵義醫(yī)學院碩士學位論文中文摘要兔骨髓問充質千細胞的成骨細胞、軟骨細胞分化研究中文摘要目的建立體外分離、培養(yǎng)兔骨髓間充質干細胞(BMSCs)的方法。初步探討B(tài)MSCs可定向分化為成骨細胞、軟骨細胞的途徑。方法抽取家兔骨髓液，．用淋巴細胞分離液梯度離，fl,獲得單個核細胞，經原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)，選擇狀態(tài)良好、經過3次傳代的細胞與原代細胞一起用于下面實驗。(1)誘導BMSCs向成骨細胞轉化：向培養(yǎng)液內加入地塞米松1×100mol／L，t3．磷酸甘油鈉10retool
2、／L，維生素C5099／mL誘導培養(yǎng)后，行堿性磷酸酶活性檢查和Vonkossa染色檢查。(2)向培養(yǎng)基中添加不同質量濃度bFGF，行MTT檢測(3)誘導BMSCs向軟骨細胞轉化：向培養(yǎng)液內加入地塞米松l×10～mol／L、維生素C5099／mL、bFGFlong／mL，培養(yǎng)1周后將bFGF換為TGF．B10ng／mL，繼續(xù)培養(yǎng)3周，行甲苯胺藍染色，RT-PCR技術檢測Ⅱ型膠原和聚集蛋白聚糖的表達。結果(1)經地塞米松、13．磷酸甘油鈉及維生素c誘導培養(yǎng)3．4周后，BMSCs轉化為成骨細胞，實驗組ALP活性明顯高于對照組，Vonkossa染色陽性。(2)10ng／mL的bFGF對BMSCs的促
3、增值能力最強。(3)BMSCs經軟骨誘導分化后骨髓間充質干細胞呈軟骨細胞形態(tài)，甲苯胺藍染色陽性，PCR證實轉化前的細胞主要表達I型膠原rnRNA。轉化后的細胞主要表達II型膠原mRNA。II型膠原和聚集蛋白聚糖的表達陽性。結論兔骨髓間充質干細胞可定向分化為成骨細胞、軟骨細胞。關鍵詞骨髓間充質干細胞，誘導培養(yǎng)，PCR，軟骨細胞，成骨細胞遵義醫(yī)學院碩士學位論文英文摘要TheresearchingonOsteoblastsandCartilagedifferentiationofrabbitbonemarrowmesenehymalstemcellsAbstructObjectiveToestab
4、lishamethodisolatingandculturingrabbitbonemarrowstromalcells(BMSCs)，afavorableconditionsinducingchondrogenicdifferentiationandmakeanartificialcartilaginousexplantsusingthedifferentiatedchondrocytes．Thentorepairthedefectsofrabbitarticularcartilageusingthisexplants．MethodExtractofrabbitbonemarrow3-4m
5、L，usingthelymphocyteseparationmediumtoobtainmononuclearcellsbygradientcentrifugation，primarycultureandsubcultureinvitro．Thefollowingexperimentadoptionprimarycellsandtheplummycellsafterfivepassages．(1)InducingtransformationofBMSCstothereticulodromousinterstitialcell：addingdexamethasone，bFGF，andvitam
6、inCintotheculturemediuminordertoinducingthecelltransformation．(2)InducingtransformationofBMSCstotheosteoblasts：addingdexamethasone，D—glycerophosphatesodiumandvitaminCintotheculturemediuminordertoinducingthecelltransformation，anddetectthedifferencesoftheactivityofalkalinephosphatase．(3)Inducingtrans
7、formationofBMSCstothechondrocytes：Addingdexamethasone，50ug／mlvitaminC，10ng／mLbFGFintotheculturemediumoftheplummyBMSCsafter2-3passagesforoneweek，thenchange10ng／mLbFGFtol0ng／mLTGF-p，andkeeponculturefor3weeks．
