發(fā)酵腸優(yōu)質(zhì)乳酸菌的分離、篩選與鑒定

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1、萬方數(shù)據(jù)分類號(hào)：Q窆3窆：壘Z密級：公開單位代碼：—100—86學(xué)號(hào)：2Q!!122發(fā)酵腸優(yōu)質(zhì)乳酸菌的分離、篩選與鑒定SelectingIsolationandIdentificationoftheLacticAcidBacteriafromthenaturalfermentedsausages學(xué)位申請人：鄭乾魏指導(dǎo)教師：張志勝學(xué)科專業(yè)：農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二。一四年五月三十日萬方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)

2、表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得莖i墾壅些盤鱟或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位敝儲(chǔ)虢獅風(fēng)簽字嗍神年歹酬日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解塑皇墾窒些盤堂有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)塑i堡壘些盤堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：絢璋b媳導(dǎo)師簽名：緲慷氍簽字日期：西l中年

3、薌月弓／日簽字日期：加I牛年籮月丐／曰學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向：工作單位：通訊地址：電話：郵編：萬方數(shù)據(jù)摘要發(fā)酵腸具有色香濃郁、風(fēng)味獨(dú)特、易消化吸收的特點(diǎn)，在各國家廣泛流行。發(fā)酵腸菌種的選育是發(fā)酵腸的核心技術(shù)。本研究擬分離篩選出具有良好的發(fā)酵特性和工藝耐受性的微生物菌種，為發(fā)酵腸的開發(fā)儲(chǔ)備新的菌種資源。本研究所得的主要結(jié)果如下：(1)本研究為了得到優(yōu)良的發(fā)酵腸菌株，利用溶鈣圈的方法，從10種來自國內(nèi)外傳統(tǒng)發(fā)酵腸樣品中分離得到76種菌株；(2)再通過革蘭氏染色試驗(yàn)、過氧化氫酶檢測試驗(yàn)、產(chǎn)黏試驗(yàn)、產(chǎn)氨試驗(yàn)、紙層析分析試驗(yàn)和抑菌試驗(yàn)的篩選之后得到8株菌株，分別為l一3、1．7、2．2、2-9、

4、4—1、6—5、7—3、9—8：(3)乳酸菌具有較強(qiáng)的產(chǎn)酸能力。在發(fā)酵過程中，其生長性能和產(chǎn)酸能力起著非常重要的作用。在配料之后接入乳酸菌，在經(jīng)歷盡可能短暫的停滯期之后，乳酸菌會(huì)很快進(jìn)入迅速增殖、快速產(chǎn)乳酸的時(shí)期，進(jìn)而抑制一些不耐酸的有害微生物的生長，從而可以減少致病菌和腐敗菌的危害。本研究所篩選得到菌株1—7、4—1、6．5、7．3均能快速生長繁殖，產(chǎn)生乳酸，且產(chǎn)酸能力較強(qiáng)形成。在培養(yǎng)12h之后，培養(yǎng)液的pH值可由起始的pH=6．35降至pH=4．00左右。通過對菌株進(jìn)行生長性能和產(chǎn)酸特性的研究之后，選擇生長情況良好、產(chǎn)酸迅速的這四株菌株作為后續(xù)研究菌株。(4)通過耐受試驗(yàn)和蛋白酶活

5、性的檢測試驗(yàn)，最后得到一株特性優(yōu)良的菌株7．3。該菌株在生長發(fā)酵過程中具有較高的蛋白酶活性，并且能在添加了150mg,'kgNaN02和6g／dLNaCl的MRS培養(yǎng)基中快速生長繁殖。(5)對該菌株7．3進(jìn)行菌落形態(tài)觀察和菌體形態(tài)觀察，其菌落形態(tài)呈圓形，邊緣較整齊且濕潤粘稠，表面光滑，半透明，不產(chǎn)生色素；經(jīng)過革蘭氏染色后，在油鏡下觀察，革蘭氏染色呈陽性，菌體為長桿狀。在經(jīng)過查閱大量文獻(xiàn)和參考《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》和《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》，對經(jīng)過大量的試驗(yàn)篩選出來的菌株7．3進(jìn)行一系列的生理生化鑒定試驗(yàn)和參照比對。最終得出結(jié)論：試驗(yàn)菌株革蘭氏染色為陽性，再結(jié)合其菌落、菌體形態(tài)特征以及生理

6、生化特征，可初步鑒定7—3為彎曲乳桿菌(Lactobacilluscurvatus)。(6)經(jīng)過提取得到供試菌株7—3的DNA基因組，用細(xì)菌的16SrDNA通用引物對該功能菌株的DNA基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增及純化，通過測定純化后的PCR產(chǎn)物序列，得到了供試菌株的l6SrDNA序列。將菌株7—3和一些相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行相似度比較，結(jié)果與彎曲乳桿菌(Lactobacilluscurvatus)的同源相似度最高，為99．71％。將該菌株7—3的菌落形態(tài)特征、菌體形態(tài)特征、21項(xiàng)基本生理生化試驗(yàn)結(jié)果及16SrDNA序列分析結(jié)果結(jié)合在一起進(jìn)行分析，最終鑒定菌株7—3為彎曲乳桿菌(Lactobacil

7、luscurvatus)。本研究結(jié)果為發(fā)酵腸微生物發(fā)菌株的篩選及鑒定奠定了科學(xué)基礎(chǔ)，為新型的發(fā)萬方數(shù)據(jù)酵腸的研究和生產(chǎn)提供了新的思路，應(yīng)用前景十分廣闊。關(guān)鍵詞：發(fā)酵腸；乳酸菌；篩選；鑒定萬方數(shù)據(jù)SelectingIsolationandIdentificationoftheLacticAcidBacteriafromthenaturalFermentedsausagesAuthor：ZhengQian—weiAdvisors：ZhangZhi—