發(fā)酵腸優(yōu)質(zhì)乳酸菌的分離、篩選與鑒定

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1、萬方數(shù)據(jù)分類號：Q窆3窆：壘Z密級：公開單位代碼：—100—86學號：2Q!!122發(fā)酵腸優(yōu)質(zhì)乳酸菌的分離、篩選與鑒定SelectingIsolationandIdentificationoftheLacticAcidBacteriafromthenaturalfermentedsausages學位申請人：鄭乾魏指導教師：張志勝學科專業(yè)：農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程學位類別：農(nóng)學碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學答辯日期：二。一四年五月三十日萬方數(shù)據(jù)獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)

2、表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得莖i墾壅些盤鱟或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均己在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位敝儲虢獅風簽字嗍神年歹酬日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解塑皇墾窒些盤堂有關保留、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權塑i堡壘些盤堂可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。(保密的學位論文在解密后適用本授權書)學位論文作者簽名：絢璋b媳導師簽名：緲慷氍簽字日期：西l中年

3、薌月弓／日簽字日期：加I牛年籮月丐／曰學位論文作者畢業(yè)后去向：工作單位：通訊地址：電話：郵編：萬方數(shù)據(jù)摘要發(fā)酵腸具有色香濃郁、風味獨特、易消化吸收的特點，在各國家廣泛流行。發(fā)酵腸菌種的選育是發(fā)酵腸的核心技術。本研究擬分離篩選出具有良好的發(fā)酵特性和工藝耐受性的微生物菌種，為發(fā)酵腸的開發(fā)儲備新的菌種資源。本研究所得的主要結果如下：(1)本研究為了得到優(yōu)良的發(fā)酵腸菌株，利用溶鈣圈的方法，從10種來自國內(nèi)外傳統(tǒng)發(fā)酵腸樣品中分離得到76種菌株；(2)再通過革蘭氏染色試驗、過氧化氫酶檢測試驗、產(chǎn)黏試驗、產(chǎn)氨試驗、紙層析分析試驗和抑菌試驗的篩選之后得到8株菌株，分別為l一3、1．7、2．2、2-9、

4、4—1、6—5、7—3、9—8：(3)乳酸菌具有較強的產(chǎn)酸能力。在發(fā)酵過程中，其生長性能和產(chǎn)酸能力起著非常重要的作用。在配料之后接入乳酸菌，在經(jīng)歷盡可能短暫的停滯期之后，乳酸菌會很快進入迅速增殖、快速產(chǎn)乳酸的時期，進而抑制一些不耐酸的有害微生物的生長，從而可以減少致病菌和腐敗菌的危害。本研究所篩選得到菌株1—7、4—1、6．5、7．3均能快速生長繁殖，產(chǎn)生乳酸，且產(chǎn)酸能力較強形成。在培養(yǎng)12h之后，培養(yǎng)液的pH值可由起始的pH=6．35降至pH=4．00左右。通過對菌株進行生長性能和產(chǎn)酸特性的研究之后，選擇生長情況良好、產(chǎn)酸迅速的這四株菌株作為后續(xù)研究菌株。(4)通過耐受試驗和蛋白酶活

5、性的檢測試驗，最后得到一株特性優(yōu)良的菌株7．3。該菌株在生長發(fā)酵過程中具有較高的蛋白酶活性，并且能在添加了150mg,'kgNaN02和6g／dLNaCl的MRS培養(yǎng)基中快速生長繁殖。(5)對該菌株7．3進行菌落形態(tài)觀察和菌體形態(tài)觀察，其菌落形態(tài)呈圓形，邊緣較整齊且濕潤粘稠，表面光滑，半透明，不產(chǎn)生色素；經(jīng)過革蘭氏染色后，在油鏡下觀察，革蘭氏染色呈陽性，菌體為長桿狀。在經(jīng)過查閱大量文獻和參考《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》和《伯杰細菌鑒定手冊》，對經(jīng)過大量的試驗篩選出來的菌株7．3進行一系列的生理生化鑒定試驗和參照比對。最終得出結論：試驗菌株革蘭氏染色為陽性，再結合其菌落、菌體形態(tài)特征以及生理

6、生化特征，可初步鑒定7—3為彎曲乳桿菌(Lactobacilluscurvatus)。(6)經(jīng)過提取得到供試菌株7—3的DNA基因組，用細菌的16SrDNA通用引物對該功能菌株的DNA基因組進行PCR擴增及純化，通過測定純化后的PCR產(chǎn)物序列，得到了供試菌株的l6SrDNA序列。將菌株7—3和一些相關標準菌株進行相似度比較，結果與彎曲乳桿菌(Lactobacilluscurvatus)的同源相似度最高，為99．71％。將該菌株7—3的菌落形態(tài)特征、菌體形態(tài)特征、21項基本生理生化試驗結果及16SrDNA序列分析結果結合在一起進行分析，最終鑒定菌株7—3為彎曲乳桿菌(Lactobacil

7、luscurvatus)。本研究結果為發(fā)酵腸微生物發(fā)菌株的篩選及鑒定奠定了科學基礎，為新型的發(fā)萬方數(shù)據(jù)酵腸的研究和生產(chǎn)提供了新的思路，應用前景十分廣闊。關鍵詞：發(fā)酵腸；乳酸菌；篩選；鑒定萬方數(shù)據(jù)SelectingIsolationandIdentificationoftheLacticAcidBacteriafromthenaturalFermentedsausagesAuthor：ZhengQian—weiAdvisors：ZhangZhi—