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《核酸疫苗的構(gòu)建、表達(dá)和免疫效應(yīng)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、f’j：◆^：1鏞答辯委員會(huì)主席：．芒查塾拯答辯委員會(huì)成員：魚(yú)墓壑塾握奎囪田塾援、論文答辯日期：2Q]Q生§旦至曼旦●■{弋◆'’嬸目錄英文縮略詞?????????????????????1中文摘要??????????????????????3英文摘要???????????????????．???5前言??????????????????????9第一部分材料與方法???????????????????11結(jié)果????????????????????18分析與討論???????????????????
2、22第二部分材料與方法???????????????????24結(jié)果????????????????????35分析與討論???????????????????43第三部分材料與方法???????????????????45結(jié)果????????????????????52分析與討論???????????????????59結(jié)??????????????????????60-7口??????????????????????UV參考文獻(xiàn)?????????????????????一60附致錄????????
3、??????????????64謝?????????．．．????????????65◆綜述及參考文獻(xiàn)?????????．．。?????????66j●√義DMEMDMSOEBEBNAEBVEDTAELISAFBSFCMFITCGFPHⅣHLAHPVHRPIFN—YIIFIL．4中文名稱(chēng)氨節(jié)青霉素別藻青蛋白丙烯酰胺過(guò)硫酸銨N-N亞甲雙丙烯酰胺堿基對(duì)互補(bǔ)脫氧核糖核酸細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞焦碳酸二乙酯Dulbecco7smodifiedDMEM培養(yǎng)基Eagle’sMediumdimethylsulfoxide
4、二甲亞楓Ethidiumbromide溴化乙啶EBvirusnuclearantigenEB病毒核抗原Epstein—BarrVirusEB病毒EthyleneDiamininetetraceticacid乙二胺四乙酸Enzyme．1inkedimmunosorbentassay酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)Fetalbovineserum胎牛血清Flowcytometry流式細(xì)胞術(shù)Fluoresceinisothiocyanate異硫氰酸熒光素Greenfluorescentprotein綠色熒光蛋白Humani
5、mmunodeficiencyvirus人免疫缺陷病毒Humanleukocyteantigen人類(lèi)白細(xì)胞抗原Humanpapillomavims人乳頭瘤病毒Horseradishperoxidase辣根過(guò)氧化物酶Interferon．YY一干擾素Indirectimmunofluorescence間接免疫熒光Interleukin．4白細(xì)胞介素一4參吐RNARr．PCRSARS—CoVSDS．PAGESLETEMEDVLP＆bonucleicacidReversetranscriptionPolym
6、erasechainreactionSARscoronavirusSDSpolyacrylamidegelElectrophoresisSystemiclupuserythematosusTetramethylethylenediamineVirus—likeparticles2核糖核酸逆轉(zhuǎn)錄PCRSARS冠狀病毒SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳系統(tǒng)性紅斑狼瘡四甲基乙二胺病毒樣顆粒DNA疫苗。并通過(guò)轉(zhuǎn)染COS一7細(xì)胞，經(jīng)RT-PCR,間接免疫熒光，Westernblot分析和電鏡觀察驗(yàn)證嵌合重組質(zhì)粒在真核中的
7、表達(dá)，及形成嵌合病毒樣顆粒的情況。3．通過(guò)免疫BALB／c小鼠，研究多表位重組質(zhì)粒pcDNA3．I(+)／EBVLMP2和嵌合重組質(zhì)粒pcDNA3．1(+瑚PV6bLl△／EBVLMP2多表位的免疫效應(yīng)，即采用ELISA檢測(cè)血清IgG和陰道分泌物slgA特異性抗體方法分析體液免疫情況；通過(guò)CTL細(xì)胞殺傷活性檢測(cè)和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)等方法分析細(xì)胞免疫情況。方法：1．將本實(shí)驗(yàn)室已篩選獲得的EBVLMP2多表位的核酸序列經(jīng)真核密碼子優(yōu)化后交由生物公司合成，并將其克隆入真核表達(dá)載體pcDNA3．1(+)上，構(gòu)
8、建pcDNA3．I(+yEBVLMP2多表位真核重組質(zhì)粒。利用轉(zhuǎn)染試劑lipofectaminem2000轉(zhuǎn)染COS．7細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR和間接免疫熒光鑒定EBVLMP2多表位的表達(dá)和定位。2．設(shè)計(jì)了擴(kuò)增真核密碼子優(yōu)化的HPV6bLl的PCR引物，并在兩端設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn)。先將密碼子優(yōu)化的HPV6bLl序列克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3．1(+)上，構(gòu)成中間質(zhì)粒pcDNA3．I(+)／HPV6bLl△。通過(guò)設(shè)計(jì)擴(kuò)增EBVLMP2多表位的PCR引物，并將其
