資源描述：
《核酸疫苗的構建、表達和免疫效應研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、f’j：◆^：1鏞答辯委員會主席：．芒查塾拯答辯委員會成員：魚墓壑塾握奎囪田塾援、論文答辯日期：2Q]Q生§旦至曼旦●■{弋◆'’嬸目錄英文縮略詞?????????????????????1中文摘要??????????????????????3英文摘要???????????????????．???5前言??????????????????????9第一部分材料與方法???????????????????11結果????????????????????18分析與討論???????????????????
2、22第二部分材料與方法???????????????????24結果????????????????????35分析與討論???????????????????43第三部分材料與方法???????????????????45結果????????????????????52分析與討論???????????????????59結??????????????????????60-7口??????????????????????UV參考文獻?????????????????????一60附致錄????????
3、??????????????64謝?????????．．．????????????65◆綜述及參考文獻?????????．．。?????????66j●√義DMEMDMSOEBEBNAEBVEDTAELISAFBSFCMFITCGFPHⅣHLAHPVHRPIFN—YIIFIL．4中文名稱氨節(jié)青霉素別藻青蛋白丙烯酰胺過硫酸銨N-N亞甲雙丙烯酰胺堿基對互補脫氧核糖核酸細胞毒性T淋巴細胞焦碳酸二乙酯Dulbecco7smodifiedDMEM培養(yǎng)基Eagle’sMediumdimethylsulfoxide
4、二甲亞楓Ethidiumbromide溴化乙啶EBvirusnuclearantigenEB病毒核抗原Epstein—BarrVirusEB病毒EthyleneDiamininetetraceticacid乙二胺四乙酸Enzyme．1inkedimmunosorbentassay酶聯(lián)免疫吸附試驗Fetalbovineserum胎牛血清Flowcytometry流式細胞術Fluoresceinisothiocyanate異硫氰酸熒光素Greenfluorescentprotein綠色熒光蛋白Humani
5、mmunodeficiencyvirus人免疫缺陷病毒Humanleukocyteantigen人類白細胞抗原Humanpapillomavims人乳頭瘤病毒Horseradishperoxidase辣根過氧化物酶Interferon．YY一干擾素Indirectimmunofluorescence間接免疫熒光Interleukin．4白細胞介素一4參吐RNARr．PCRSARS—CoVSDS．PAGESLETEMEDVLP＆bonucleicacidReversetranscriptionPolym
6、erasechainreactionSARscoronavirusSDSpolyacrylamidegelElectrophoresisSystemiclupuserythematosusTetramethylethylenediamineVirus—likeparticles2核糖核酸逆轉錄PCRSARS冠狀病毒SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳系統(tǒng)性紅斑狼瘡四甲基乙二胺病毒樣顆粒DNA疫苗。并通過轉染COS一7細胞，經RT-PCR,間接免疫熒光，Westernblot分析和電鏡觀察驗證嵌合重組質粒在真核中的
7、表達，及形成嵌合病毒樣顆粒的情況。3．通過免疫BALB／c小鼠，研究多表位重組質粒pcDNA3．I(+)／EBVLMP2和嵌合重組質粒pcDNA3．1(+瑚PV6bLl△／EBVLMP2多表位的免疫效應，即采用ELISA檢測血清IgG和陰道分泌物slgA特異性抗體方法分析體液免疫情況；通過CTL細胞殺傷活性檢測和細胞內細胞因子檢測等方法分析細胞免疫情況。方法：1．將本實驗室已篩選獲得的EBVLMP2多表位的核酸序列經真核密碼子優(yōu)化后交由生物公司合成，并將其克隆入真核表達載體pcDNA3．1(+)上，構
8、建pcDNA3．I(+yEBVLMP2多表位真核重組質粒。利用轉染試劑lipofectaminem2000轉染COS．7細胞，通過RT-PCR和間接免疫熒光鑒定EBVLMP2多表位的表達和定位。2．設計了擴增真核密碼子優(yōu)化的HPV6bLl的PCR引物，并在兩端設計酶切位點。先將密碼子優(yōu)化的HPV6bLl序列克隆至真核表達載體pcDNA3．1(+)上，構成中間質粒pcDNA3．I(+)／HPV6bLl△。通過設計擴增EBVLMP2多表位的PCR引物，并將其
