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《堿蓬gst基因cdna的克隆與表達(dá)及堿蓬cdna過量表達(dá)文庫轉(zhuǎn)化擬南芥的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文堿蓬GST基因cDNA的克隆與表達(dá)及堿蓬cDNA過量表達(dá)文庫轉(zhuǎn)化擬南芥的研究姓名：王麗萍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師：趙彥修2002.4.29Y，448471中文摘要}l'k脅迫包括細(xì)胞的滲適脅迫和離子1111迫，以及山這兩種肋、迫](u)`"I:的次級脅迫即活性氧脅迫。細(xì)胞'I'積米的大雖活性氧能夠異致蛋自質(zhì)、膜脂、DNA及只它細(xì)胞組分的嚴(yán)重?fù)p傷。植物體內(nèi)的抗乳化系統(tǒng)可以分為N促反應(yīng)系統(tǒng)和III"i1i促反應(yīng)系統(tǒng)，幾中酶促反應(yīng)系統(tǒng)主要包括超氧化物歧化i51i(SOD)、過牡化'-,(Itiit(CA
2、F)、補(bǔ)膚一i膚轉(zhuǎn)移酶(GST)、谷)JAI}一月太過氧化物?%(GPOX).」亢壞1111A過權(quán)化物Iryig(APX)""oGSTh不僅能催化降解有毒的內(nèi)源或異源代謝產(chǎn)物，降低這些物質(zhì)分致的認(rèn)化擬傷;fu川.ij時具有GPOX活性，能夠直接潔除細(xì)胞內(nèi)的活性較。石。:物GSTlihcDNA克1:j}x!i!從谷類作物，I'分離到，后Al也d一lI`1PI}.(I:大1、、、'.,鈴A,.煙草、擬南芥中分離到。在煙草，}“己鑒定G,7'摧囚的過{:{農(nóng)達(dá)分別有效的增強(qiáng)了J紅ildl受fk脅迫和抗冷凍的能力。tk地堿蓬(Suaedasals
3、a)足一種可以在400mMNaC!的濃度卜}_常'-I:L}Ii'JIlilJ}fH水植物。從鹽地堿蓬幼苗的cDNA文庫的1000余個ESTs(ExpressedSequenceTags)'-I'獲得一個約0.6kb的EST，同源性分析表明該EST與已報告的大;>'.(Glycinemax)GSTcDNA的同源性達(dá)55%。上述EST經(jīng)通川載體引物xxi句測序獲得其個氏cDNAIJ'列，GenBank登錄號是AF3214370該基因可能編1iqe山230個氮基酸211成II`J},TlftII-)扶轉(zhuǎn)移酶(GST)，將其與同源性較高的4個G
4、STcDNA進(jìn)行氦Mm}PiJ;VI"I比較，表現(xiàn)JI較高的保守性。Southern雜交結(jié)果證明GST基因在堿蓮從因組中'1iii有至少兩個以_}二的拷貝;Northern雜交結(jié)果表明，400mMNaCl處理48h，幼叫'I'GSTmRNA的表達(dá)量是對照的2-3倍，說明堿蓬中GS7'11';1);}受。。誘導(dǎo)戶廠我們建立了一個過量表達(dá)堿蓬cDNA文庫的系統(tǒng)，用以進(jìn)行」以南芥的大規(guī)模轉(zhuǎn)化。過量表達(dá)載體日」pCAMBIA1200和pRT105組裝If11成，使得cDNA文庫丫}Camv35S啟動子作用下過量表達(dá)。用cDNA插入J'兩鋇9的載體
5、引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果表明cDNA文庫中至少94%的克隆含有。DNA插入丁J二。將過4}.}達(dá)文)鈞溝混合質(zhì)半U.經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)用花序浸泡法進(jìn)行擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化，在篩選的100.000粒種戶}』獲得500株潮霉素抗性苗，8株表現(xiàn)出特異表型。在T，代中，僅有20%的轉(zhuǎn)}ltPII植株為中拷貝插入。轉(zhuǎn)墓因棺株的PCR鑒定呈現(xiàn)陽側(cè)，1七16l寸1,l",性分析iI*fl進(jìn)行之中。關(guān)鍵詞:活性氧脅迫、谷Il)L甘)a轉(zhuǎn)移酶耐翩cDNAi:11ii表達(dá)文庫、擬南芥、轉(zhuǎn)基因植株分類號:Q78CloningandExpressionofGSTGeneo
6、fSuaedasalsaandTransformationofSuaedacDNAOver-expressionLibraryinArabidopsisSaltstressconsistsofosmoticandionicstress,thenthesecondarystresswhichiscalledoxidativestressfollowingtheformers.Theimpositionofenvironmentalstressleadstoincreasingproductionofreactiveoxygenspecies
7、(ROS)inplantcells,whichcandamageproteins,membranelipids,DNAandothercellularcomponents.Plantshaveevolvedprotectionmechanismswhichincludeenzymaticreactionsystemandno-enzymaticreactionsystem.Theenzymaticreactionsystemmainlyincludessuperoxidedismutase(SOD),catalase(CAT),gluta
8、thioneS-transferase(GST),glutathioneperoxidase(GOPX),ascorbateperoxidase(APX)andsoon.Glutathione
