綿羊卵母細(xì)胞孤雌激活與體細(xì)胞核移植

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1、西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文綿羊卵母細(xì)胞孤雌激活與體細(xì)胞核移植姓名：張曉建申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師：張涌;陳靜波20050601綿羊卵母細(xì)胞孤雌激活與體細(xì)胞核移植摘要哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核移植是一項(xiàng)復(fù)雜而有序的操作過程。本文從不同方面研究了綿羊卵母細(xì)胞的體外成熟、孤雌激活以及重構(gòu)胚的構(gòu)建過程，建立了一套比較穩(wěn)定的核移植體系，其結(jié)果如下：1．分析了EGF不同添加量、FSH：LH的不同配比和不同大小卵泡的卵泡液對(duì)綿羊卵母細(xì)胞的體外成熟的影響。結(jié)果表明：(1)添加30ng／mlEGF顯著高于其他試驗(yàn)組的成熟率(

2、85．0％VS60．O％，71．7％，72．7％，P<0．05)，并可提高綿羊孤雌激活胚的囊胚發(fā)育率；(2)成熟液中添加FSH1ug／ml，LH5．0IU／ml成熟率最高；(3)在綿羊卵母細(xì)胞成熟液中添加3％綿羊大卵泡液，在成熟率上極顯著高于小卵泡液的20％添加組(78．6％VS36．5％，P

3、4h、26h的卵母細(xì)胞玻璃化冷凍、解凍后形態(tài)正常率差異不顯著(P>O．05)，培養(yǎng)24h卵母細(xì)胞冷凍保存后，卵裂率、囊胚率與培養(yǎng)Oh、16h、26h試驗(yàn)組差異顯著(38．3％vs13．3％、26．7％、28_3％；13．O％VS0％、6．3％、5．9％，P<0．05)，而培養(yǎng)16h、26h兩個(gè)試驗(yàn)組之間差異不顯著(P>O．05)。結(jié)果表明：成熟培養(yǎng)24h的卵母細(xì)胞OPS玻璃化冷凍效果最好，成熟培養(yǎng)16h、26h次之，而不經(jīng)過成熟培養(yǎng)的卵母細(xì)胞玻璃化冷凍效果最差。3．研究了不同化學(xué)激活方法對(duì)綿羊孤雌生殖胚胎發(fā)育的影響。

4、在囊胚率上，Ionomycin聯(lián)合6-DMAP與聯(lián)合6-DMAP+CB差異不顯著，而與聯(lián)合CB組差異顯著(P<0．05)，與單獨(dú)Ionomycin激活差異極顯著(P

5、雌生殖胚胎發(fā)育的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1．2Kv／cm的直流脈沖具有最佳激活效果，與1．6Kv／cm組差異不顯著，但與0．8Kv／cm、2．0Kv／cm組在卵裂率、囊胚率上差異顯著。脈沖次數(shù)3次效果最好，其卵裂章、囊胚率顯著高于2次脈沖(P<0．05)，與1次脈沖差異極顯著(P<0．01)。5．分析了不同成熟時(shí)間卵母細(xì)胞和不同時(shí)期卵母細(xì)胞去核的效率。研究發(fā)現(xiàn)：(1)綿羊卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)19～21h的較適合于作為受體細(xì)胞進(jìn)行綿羊核移植；(2)TII期去核能夠用于綿羊核移植，但不能提高重構(gòu)胚的發(fā)育能力。6．研究了去核卵母細(xì)

6、胞的高滲處理和供體細(xì)胞的血清饑餓處理對(duì)綿羊核移植效率的影響。結(jié)果表明：(1)高滲處理可以顯著提高帶下注核效率和融合率，但對(duì)重構(gòu)胚以后的發(fā)育沒有影響；(2)血清饑餓和高匯合度處理供體細(xì)胞兩者沒有顯著差異，但兩者在融合率上顯著高于原代顆粒細(xì)胞。關(guān)鍵詞綿羊卵母細(xì)胞，體外成熟，玻璃化冷凍，孤雌激活，核移植PARTHENoGENETICACTI、，A~TIONANDSOMATICCELLNUCLEARTRANSFERlNSHEEPABSTRACTMammaliansomaticnucleartransplantationisa

7、complicatedandorderfulprocess．Thispaperresearchedtheprocessesofsheepoocyteinvitromaturation、parthenogeticandthereconstructionofembryo，andestablishedaseriesofmoresteadynucleartransfersystem．Theresultsareasfollows：1．Theinfluencingfactorsc,oncernsheepoocyteⅣMincul

8、turemediumwerestudiedthough3methods．Thatwas：theconcentrationofepithelialgrowthfactor(EGF)．theconcentrationofFSHandLHandtheadditionofdifferentdiameterfollicuteliquid．Itshowed