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1、第一節(jié)核酸的分離純化 第二節(jié)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR） 第三節(jié)凝膠電泳系統(tǒng) 第四節(jié)核酸的分子雜交 第五節(jié)核苷酸序列分析 第六節(jié)基因工程第五章分子生物學(xué)實驗技術(shù)分子生物學(xué)研究之所以從20世紀(jì)中葉開始得到高速發(fā)展，其中最主要的原因就是現(xiàn)代分子生物學(xué)研究方法、特別是基因操作和基因工程技術(shù)的進(jìn)步。DNA分子的切割與連接核酸分子雜交凝膠電泳細(xì)胞轉(zhuǎn)化核酸序列分析基因的人工合成基因操作基因的定點突變PCR擴(kuò)增等核心技術(shù)基因工程誕生的基礎(chǔ)1、理論上的三大成就2、技術(shù)上的二大發(fā)明三大成就：1.40年代確定了遺傳信息的攜帶者，即基因的分子載體是DNA而不是蛋白質(zhì)，解決了遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)問題
2、；1928FrederickGriffith&1944OswaldAveryTransformationofStreptococcuspneumoniae1952年Hershey和Chase證實噬菌體DNA侵染細(xì)菌實驗2.50年代揭示了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機(jī)制,解決了基因的自我復(fù)制和世代交替問題；X-raysourceCrystallizedDNARosalindFranklin拍出了第一張能反映DNA美麗雙螺旋結(jié)構(gòu)的X射線照片MauriceWilkinsPhotographicfilm1953-Franklin&WilkinsDescriptio
3、nofthe3-DstructureofDNAFrancisCrick&JamesWatson三位科學(xué)家因為對這一成果的貢獻(xiàn)，共享1962年的諾貝爾生物學(xué)獎ConservativeModelSemiconservativeModelFrankStahlMattMeselsonParentcellFirstreplicationSecondreplication1958-MatthewMeselson&FranklinStahlprovedthatDNAreplicationinbacteriafollowsthesemiconservativepathway3.50
4、年代末至60年代，相繼提出了"中心法則"和操縱子學(xué)說,成功地破譯了遺傳密碼，充分認(rèn)識了遺傳信息的流動和表達(dá)。JacobandMonod但是，如果沒有分離和富集單一DNA分子的技術(shù)，科學(xué)家就無法對這類物質(zhì)進(jìn)行直接的生化分析。兩大技術(shù)保證：1.DNA的體外切割和連接1962年Arber發(fā)現(xiàn)限制性核酸內(nèi)切酶，1967Gellert發(fā)現(xiàn)了DNA連接酶（DNAligase）一把特殊的剪刀—限制性內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)阿爾伯(Arber)、史密斯(Smith)和內(nèi)森斯(Nathans)， 獲1978年諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎HerbertBoyer,StanleyCohen1972年獲得第一
5、個重組DNA分子(實現(xiàn)不同來源DNA的重組)HerbertBoyer1972-PaulBergProducedfirstrecombinantDNAusingEcoRIEcoRIrecognitionsitesλphageDNAEcoRIcutsDNAintofragmentsStickyendSV40DNAThetwofragmentssticktogetherbybasepairingDNAligaseRecombinantDNA1973-Boyer,Cohen&ChangTransformE.coliwithrecombinantplasmidStanleyC
6、ohen&AnnieChanHerbertBoyerKanamycinresistancegenePlasmidpSC101TetracyclineresistancegeneE.colitransformedwithrecombinantplasmidTransformedcellsplatedontomediumwithkanamycinandtetracyclineOnlycellswithrecombinantplasmidsurvivetoproducecolonies2.DNA的核苷酸序列分析技術(shù)DNA核苷酸序列分析法是在核酸的酶學(xué)和生物化學(xué)的基礎(chǔ)上創(chuàng)立
7、并發(fā)站起來的一門重要的DNA技術(shù)學(xué)，這門技術(shù)，對于從分子水平上研究基因的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系，以及克隆DNA片斷的操作方面，都有著十分廣泛的使用價值。Generalprocessofgeneengineering1.從生物有機(jī)體基因組中，分離出帶有目的基因的DNA片段。2.將帶有目的基因的外源DNA片段連接到能夠自我復(fù)制的并具有選擇記號的載體分子上，形成重組DNA分子。3.將重組DNA分子轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞（亦稱寄主細(xì)胞）并與之一起增殖。4.從大量的細(xì)胞繁殖群體中，篩選出獲得了重組DNA分子的受體細(xì)胞，并篩選出已經(jīng)得到擴(kuò)增的目的基因。5.將目的基因克隆到表達(dá)載體上
