熒光假單胞菌對食用菌生長促進作用探究

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1、熒光假單胞菌對食用菌生長促進作用探究　　摘要研究熒光假單胞菌對食用菌生長的促進作用，結(jié)果表明：不同菌液對不同種食用菌香菇、平菇、雞腿菇、白靈菇、雙孢蘑菇、杏鮑菇的促生效果不同。在平菇、杏鮑菇、雙孢蘑菇、雞腿菇絲生長的共培養(yǎng)試驗中，熒光假單胞菌的促進作用明顯，以平菇最為顯著。白靈菇菌絲生長的共培養(yǎng)試驗中，沒有觀察到明顯的促進作用。然而在香菇菌絲生長的共培養(yǎng)試驗中發(fā)現(xiàn)顯著的抑制作用。平菇出菇試驗結(jié)果表明，添加菌液的菇袋，菌絲滿袋時間較不添加菌液的對照提前5～8d。原基分化、子實體形成也提前約1周的時間，同時出菇產(chǎn)量提高11.9%。關(guān)鍵詞食用菌；熒光假單胞菌；16SrDNA鑒定；促生長

2、作用中圖分類號S646文獻標識碼A文章編號1007-5739（2013）02-0071-0413食用菌由于其獨特的風味、豐富的營養(yǎng)和特殊的療效，其鮮品和各種深加工產(chǎn)品符合人們的消費理念和生活追求，已經(jīng)成為老百姓“菜籃子”的重要組成部分。以食用菌為主導的白色農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)正成為新型效益農(nóng)業(yè)的生力軍。改造傳統(tǒng)食用菌運作方式，發(fā)展現(xiàn)代設(shè)施化農(nóng)業(yè)，形成具有區(qū)域特色的產(chǎn)業(yè)鏈，為農(nóng)業(yè)增效、農(nóng)民增收及農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化提供了強有力的技術(shù)支撐。目前，國內(nèi)食用菌栽培料多經(jīng)過巴氏殺菌、堆積發(fā)酵處理或采用生料[1]。在食用菌生長發(fā)育的不同時期，栽培料中微生物組成成分、種類及數(shù)量均隨之變動[2-3]，在子實體形成時期

3、熒光假單胞菌[4-5]數(shù)量達到峰值。研究結(jié)果表明，微生物的數(shù)量及組成對食用菌菌絲生長速度和子實體分化起著十分重要的作用[6-8]。Kimetal報道過Pseudomonassp.P7014對杏鮑菇菌絲生長及早期子實體形成的過程中所起的誘導作用[9]，并分別對其菌體和代謝物在促進菌絲生長方面的作用進行了研究，目的是利用此特點使杏鮑菇的產(chǎn)量提高，最終在商業(yè)領(lǐng)域開發(fā)和利用。鑒于此，該文利用此特點分離篩選產(chǎn)熒光的假單胞菌菌株，并將初步篩選到的菌株與平菇菌絲共培養(yǎng)，兩者的共培養(yǎng)采取PDA平板共培養(yǎng)和在裝有棉籽殼的試管里共培養(yǎng)的方法，初步研究其對平菇菌絲生長的影響，篩選出對平菇菌絲生長起促進

4、作用的菌株，從而有效縮短平菇的生產(chǎn)周期，為進一步研究提高平菇產(chǎn)量積累了材料。同時，通過此次試驗可以逐步考慮將平菇菌絲生長的促生菌制成微生物活菌制劑，有助于將來在商業(yè)領(lǐng)域的開發(fā)及其利用。1材料與方法1.1試驗材料13鄭州市平菇菌袋12個樣：①長滿菌絲并出菇；②菌袋一半長菌絲一半沒長菌絲；③長滿菌絲但未出菇；④菌袋兩頭長有少量菌絲。鄭州市郊區(qū)不同的小麥和油菜地里取根際土，共18個土樣。鄭州市郊區(qū)雙孢菇土樣16個樣：①長滿菌絲的稻草；②覆土后接近菌絲的土樣；③未長滿菌絲的稻草；④覆土后接近菌絲的土樣。安徽文昌西扎村桃源取根際土樣共14個樣。共取樣60個，所有材料的采集采用無菌操作，采集

5、后分別放入無菌袋，4℃冷藏保存。1.2試驗方法1.2.1產(chǎn)熒光菌株的初篩及純化分離。對于前12個樣分別取菌袋的表面和深層培養(yǎng)料少許放入含90mL無菌水的三角瓶中，置搖床振蕩15～20min，使微生物細胞分散，靜置20～30s，即成10-1的懸液。對后面幾個土樣則按土壤稀釋液的制備方法稱取10g進行稀釋。采用平板稀釋法[10]將所取材料用無菌水以10倍梯度稀釋成10-4～10-1稀釋液，取10-4～10-1稀釋液各0.2mL涂MS平板（或King′sB培養(yǎng)基），28℃培養(yǎng)48h，檢查分離結(jié)果，挑取單個菌落并劃線分離，純化培養(yǎng)，直至用顯微鏡涂片染色檢查為單一微生物為止，同時將初篩到的

6、菌進行相應(yīng)編號并保存，平菇菌袋里篩選到的菌編號為（1～25），小麥和油菜地里篩選到的菌編號為（a～y），雙孢菇培養(yǎng)料里篩選到的菌編號為（A～T），西扎村桃源取根際土樣篩選到的菌編號為（26），將所篩選到的菌做簡單鑒定，觀察菌落形態(tài)、顏色、菌落大小及產(chǎn)熒光色素的情況。挑取36613nm波長紫外光下發(fā)綠色熒光的菌落純化培養(yǎng)并保存。1.2.2熒光假單胞菌生理生化特性鑒定試驗[11-12]。一是篩選試驗復篩優(yōu)選出促進生長作用顯著的3種菌株。平板及試管待篩細菌與平菇菌絲共培養(yǎng)試驗。平菇菌種的活化[1]所篩選菌株與平菇菌絲共培養(yǎng)采取以下2種方式：①PDA平板試驗。取初篩分離純化后保存的菌株轉(zhuǎn)

7、管活化于28℃恒溫箱中培養(yǎng)24h，然后接入裝有100mL牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，置于28℃、220r/mim搖床振蕩培養(yǎng)24h，得到培養(yǎng)好的飽和細菌菌液。按無菌操作要求將菌液分別用無菌水稀釋到10-1和10-2后，各吸取0.2mL對號接入已寫好稀釋度的PDA平板中，每個號碼設(shè)3個重復，用無菌玻璃涂棒涂布均勻涂布平板上，用直徑1cm打孔器從長滿平菇菌絲平板上獲取相同接種量的菌絲塊，將其與平菇菌絲共培養(yǎng)，放于涂好菌的平板中央。對照組PDA平板中加入0.2mL的無菌