熒光假單胞菌對(duì)食用菌生長(zhǎng)促進(jìn)作用探究

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1、熒光假單胞菌對(duì)食用菌生長(zhǎng)促進(jìn)作用探究　　摘要研究熒光假單胞菌對(duì)食用菌生長(zhǎng)的促進(jìn)作用，結(jié)果表明：不同菌液對(duì)不同種食用菌香菇、平菇、雞腿菇、白靈菇、雙孢蘑菇、杏鮑菇的促生效果不同。在平菇、杏鮑菇、雙孢蘑菇、雞腿菇絲生長(zhǎng)的共培養(yǎng)試驗(yàn)中，熒光假單胞菌的促進(jìn)作用明顯，以平菇最為顯著。白靈菇菌絲生長(zhǎng)的共培養(yǎng)試驗(yàn)中，沒有觀察到明顯的促進(jìn)作用。然而在香菇菌絲生長(zhǎng)的共培養(yǎng)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)顯著的抑制作用。平菇出菇試驗(yàn)結(jié)果表明，添加菌液的菇袋，菌絲滿袋時(shí)間較不添加菌液的對(duì)照提前5～8d。原基分化、子實(shí)體形成也提前約1周的時(shí)間，同時(shí)出菇產(chǎn)量提高11.9%。關(guān)鍵詞食用菌；熒光假單胞菌；16SrDNA鑒定；促生長(zhǎng)

2、作用中圖分類號(hào)S646文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1007-5739（2013）02-0071-0413食用菌由于其獨(dú)特的風(fēng)味、豐富的營(yíng)養(yǎng)和特殊的療效，其鮮品和各種深加工產(chǎn)品符合人們的消費(fèi)理念和生活追求，已經(jīng)成為老百姓“菜籃子”的重要組成部分。以食用菌為主導(dǎo)的白色農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)正成為新型效益農(nóng)業(yè)的生力軍。改造傳統(tǒng)食用菌運(yùn)作方式，發(fā)展現(xiàn)代設(shè)施化農(nóng)業(yè)，形成具有區(qū)域特色的產(chǎn)業(yè)鏈，為農(nóng)業(yè)增效、農(nóng)民增收及農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。目前，國(guó)內(nèi)食用菌栽培料多經(jīng)過巴氏殺菌、堆積發(fā)酵處理或采用生料[1]。在食用菌生長(zhǎng)發(fā)育的不同時(shí)期，栽培料中微生物組成成分、種類及數(shù)量均隨之變動(dòng)[2-3]，在子實(shí)體形成時(shí)期

3、熒光假單胞菌[4-5]數(shù)量達(dá)到峰值。研究結(jié)果表明，微生物的數(shù)量及組成對(duì)食用菌菌絲生長(zhǎng)速度和子實(shí)體分化起著十分重要的作用[6-8]。Kimetal報(bào)道過Pseudomonassp.P7014對(duì)杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)及早期子實(shí)體形成的過程中所起的誘導(dǎo)作用[9]，并分別對(duì)其菌體和代謝物在促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)方面的作用進(jìn)行了研究，目的是利用此特點(diǎn)使杏鮑菇的產(chǎn)量提高，最終在商業(yè)領(lǐng)域開發(fā)和利用。鑒于此，該文利用此特點(diǎn)分離篩選產(chǎn)熒光的假單胞菌菌株，并將初步篩選到的菌株與平菇菌絲共培養(yǎng)，兩者的共培養(yǎng)采取PDA平板共培養(yǎng)和在裝有棉籽殼的試管里共培養(yǎng)的方法，初步研究其對(duì)平菇菌絲生長(zhǎng)的影響，篩選出對(duì)平菇菌絲生長(zhǎng)起促進(jìn)

4、作用的菌株，從而有效縮短平菇的生產(chǎn)周期，為進(jìn)一步研究提高平菇產(chǎn)量積累了材料。同時(shí)，通過此次試驗(yàn)可以逐步考慮將平菇菌絲生長(zhǎng)的促生菌制成微生物活菌制劑，有助于將來(lái)在商業(yè)領(lǐng)域的開發(fā)及其利用。1材料與方法1.1試驗(yàn)材料13鄭州市平菇菌袋12個(gè)樣：①長(zhǎng)滿菌絲并出菇；②菌袋一半長(zhǎng)菌絲一半沒長(zhǎng)菌絲；③長(zhǎng)滿菌絲但未出菇；④菌袋兩頭長(zhǎng)有少量菌絲。鄭州市郊區(qū)不同的小麥和油菜地里取根際土，共18個(gè)土樣。鄭州市郊區(qū)雙孢菇土樣16個(gè)樣：①長(zhǎng)滿菌絲的稻草；②覆土后接近菌絲的土樣；③未長(zhǎng)滿菌絲的稻草；④覆土后接近菌絲的土樣。安徽文昌西扎村桃源取根際土樣共14個(gè)樣。共取樣60個(gè)，所有材料的采集采用無(wú)菌操作，采集

5、后分別放入無(wú)菌袋，4℃冷藏保存。1.2試驗(yàn)方法1.2.1產(chǎn)熒光菌株的初篩及純化分離。對(duì)于前12個(gè)樣分別取菌袋的表面和深層培養(yǎng)料少許放入含90mL無(wú)菌水的三角瓶中，置搖床振蕩15～20min，使微生物細(xì)胞分散，靜置20～30s，即成10-1的懸液。對(duì)后面幾個(gè)土樣則按土壤稀釋液的制備方法稱取10g進(jìn)行稀釋。采用平板稀釋法[10]將所取材料用無(wú)菌水以10倍梯度稀釋成10-4～10-1稀釋液，取10-4～10-1稀釋液各0.2mL涂MS平板（或King′sB培養(yǎng)基），28℃培養(yǎng)48h，檢查分離結(jié)果，挑取單個(gè)菌落并劃線分離，純化培養(yǎng)，直至用顯微鏡涂片染色檢查為單一微生物為止，同時(shí)將初篩到的

6、菌進(jìn)行相應(yīng)編號(hào)并保存，平菇菌袋里篩選到的菌編號(hào)為（1～25），小麥和油菜地里篩選到的菌編號(hào)為（a～y），雙孢菇培養(yǎng)料里篩選到的菌編號(hào)為（A～T），西扎村桃源取根際土樣篩選到的菌編號(hào)為（26），將所篩選到的菌做簡(jiǎn)單鑒定，觀察菌落形態(tài)、顏色、菌落大小及產(chǎn)熒光色素的情況。挑取36613nm波長(zhǎng)紫外光下發(fā)綠色熒光的菌落純化培養(yǎng)并保存。1.2.2熒光假單胞菌生理生化特性鑒定試驗(yàn)[11-12]。一是篩選試驗(yàn)復(fù)篩優(yōu)選出促進(jìn)生長(zhǎng)作用顯著的3種菌株。平板及試管待篩細(xì)菌與平菇菌絲共培養(yǎng)試驗(yàn)。平菇菌種的活化[1]所篩選菌株與平菇菌絲共培養(yǎng)采取以下2種方式：①PDA平板試驗(yàn)。取初篩分離純化后保存的菌株轉(zhuǎn)

7、管活化于28℃恒溫箱中培養(yǎng)24h，然后接入裝有100mL牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，置于28℃、220r/mim搖床振蕩培養(yǎng)24h，得到培養(yǎng)好的飽和細(xì)菌菌液。按無(wú)菌操作要求將菌液分別用無(wú)菌水稀釋到10-1和10-2后，各吸取0.2mL對(duì)號(hào)接入已寫好稀釋度的PDA平板中，每個(gè)號(hào)碼設(shè)3個(gè)重復(fù)，用無(wú)菌玻璃涂棒涂布均勻涂布平板上，用直徑1cm打孔器從長(zhǎng)滿平菇菌絲平板上獲取相同接種量的菌絲塊，將其與平菇菌絲共培養(yǎng)，放于涂好菌的平板中央。對(duì)照組PDA平板中加入0.2mL的無(wú)菌