csf和其誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞對成骨細(xì)胞的影響的論文

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1、CSF和其誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞對成骨細(xì)胞的影響的論文【摘要】目的：探討gmcsf和其誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞對成骨細(xì)胞生長的影響。方法：采用分組對照、細(xì)胞計(jì)數(shù)等方法進(jìn)行研究。結(jié)果：gmcsf和其誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞可以促進(jìn)成骨細(xì)胞生長。結(jié)論：gmcsf和其誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖、分化，可能是通過破骨細(xì)胞內(nèi)gmcsf介導(dǎo)的信號通路而發(fā)揮作用?！娟P(guān)鍵詞】gmcsf破骨細(xì)胞成骨細(xì)胞　　effectofgmcsfanditsinducingosteoclastontheproliferationofosteoblast　　liuzheng,suny

2、uanming,xiaoxiangjun,liyumin,sunyong,yangfujun.　　instituteofradiationmedicine,chineseacademyofmedicalsciencespekingunionmedicalcollege,tianjin300192,china　?。踑bstract］objective:tostudytheeffectofgmcsfanditsinducingosteoclastonproliferationofosteoblast.methods:contrast

3、todivideintogroupstobeadoptedandthecellcounts,usetheanalysisofvariancetoexamine,definethisrelation.results:gmcsfanditsinducingosteoclastinducedproliferationofosteoblast.conclusion:gmcsfcanactivatethesignalpathetime,expressgeneresulttoproliferationofosteoblast.　?。踜eycsf

4、；osteoclast；osteoblast　　gmcsf對破骨細(xì)胞的發(fā)育有著重要作用，我們實(shí)驗(yàn)室建立了一整套的應(yīng)用gmcsf等細(xì)胞因子將源于小鼠脾干細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)成破骨細(xì)胞的技術(shù)［1，2］。.破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞彼此間相互作用，調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)的成骨和破骨作用的平衡。gmcsf介導(dǎo)的細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路引起破骨細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)是否對成骨細(xì)胞產(chǎn)生影響，目前還不清楚。我們采用分組對照、細(xì)胞計(jì)數(shù)等實(shí)驗(yàn)方法對此進(jìn)行了觀察?！　?材料與方法　　1.1材料、試劑4～6周齡c57雌性小鼠由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供；鼠成骨細(xì)胞株mc3t3e1購自am

5、ericantypeculturecollection公司；amem培養(yǎng)基為gibco公司產(chǎn)品；5氟尿嘧啶（5fu）購自上海旭東海譜藥業(yè)有限公司；1，25（oh）2d3由丹麥lisebinderup博士惠贈；胎牛血清（fcs）、牛血清白蛋白（bsa）、瓊脂、il3、il6以及gmcsf均購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病學(xué)研究所?！　?.2破骨細(xì)胞的培養(yǎng)6周齡的c57雌性小鼠，按每只150mg/kg的劑量注射5fu，5天后拉頸處死。取出脾臟，制備脾細(xì)胞，將其接種于含5×104u/lil3、10-8mol/lil6、300ml/l

6、fcs及10g/lbsa的3g/lamem半固體培養(yǎng)基中，于37℃、5%co2條件下培養(yǎng)15天。形成的細(xì)胞集落，接種于含2×105u/lgmcsf和50ml/lfcs的amem培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件同前。然后將培養(yǎng)液換成含1×10-8mol/l1，25（oh）2d3、100ml/lfcs的amem培養(yǎng)液，上述條件再培養(yǎng)15天，于顯微鏡下觀察到破骨細(xì)胞的生長。用1g/l胰酶消化細(xì)胞，在培養(yǎng)液中充分搖勻，轉(zhuǎn)種到22個培養(yǎng)皿中，于同樣條件培養(yǎng)20天。挑選出2個培養(yǎng)皿，對皿中的破骨細(xì)胞抗酒石酸鹽酸性磷酸酶染色（trap），可以更清晰地看到生

7、長的破骨細(xì)胞，見圖1～3?！　?.3成骨細(xì)胞的培養(yǎng)將mc3t3e1細(xì)胞接種于含100ml/lfcs的amem培養(yǎng)基中，37℃、5%co2培養(yǎng)20天左右，觀察到成骨細(xì)胞生長。然后用1g/l胰酶消化，在培養(yǎng)液中充分搖勻，轉(zhuǎn)種到20個培養(yǎng)皿中，于相同條件培養(yǎng)20天?！　?.4實(shí)驗(yàn)分組、培養(yǎng)與細(xì)胞計(jì)數(shù)培養(yǎng)20天的成骨細(xì)胞都充分生長，且30個皿內(nèi)成骨細(xì)胞長勢基本相同。將30個培養(yǎng)皿隨機(jī)分為a、b和c組，每組10個平皿。a為實(shí)驗(yàn)組，b和c為對照組。將余下20個皿中生長的破骨細(xì)胞，用1g/l胰酶消化并在培養(yǎng)液中混勻，平均加入到a、b組中，同時向a、

8、c組每個皿內(nèi)加入500u的gmcsf，37℃、5%co2培養(yǎng)20天。最后將培養(yǎng)皿中的細(xì)胞用胰蛋白酶消化下來，顯微鏡下對實(shí)驗(yàn)組和對照組的成骨細(xì)胞計(jì)數(shù)，結(jié)果進(jìn)行方差分析?！　D1經(jīng)trap染色的