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《csf和其誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞對(duì)成骨細(xì)胞的影響的論文》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、CSF和其誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞對(duì)成骨細(xì)胞的影響的論文【摘要】目的:探討gmcsf和其誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞對(duì)成骨細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。方法:采用分組對(duì)照、細(xì)胞計(jì)數(shù)等方法進(jìn)行研究。結(jié)果:gmcsf和其誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞可以促進(jìn)成骨細(xì)胞生長(zhǎng)。結(jié)論:gmcsf和其誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖、分化,可能是通過(guò)破骨細(xì)胞內(nèi)gmcsf介導(dǎo)的信號(hào)通路而發(fā)揮作用。【關(guān)鍵詞】gmcsf破骨細(xì)胞成骨細(xì)胞 effectofgmcsfanditsinducingosteoclastontheproliferationofosteoblast liuzheng,suny
2、uanming,xiaoxiangjun,liyumin,sunyong,yangfujun. instituteofradiationmedicine,chineseacademyofmedicalsciencespekingunionmedicalcollege,tianjin300192,china ?。踑bstract]objective:tostudytheeffectofgmcsfanditsinducingosteoclastonproliferationofosteoblast.methods:contrast
3、todivideintogroupstobeadoptedandthecellcounts,usetheanalysisofvariancetoexamine,definethisrelation.results:gmcsfanditsinducingosteoclastinducedproliferationofosteoblast.conclusion:gmcsfcanactivatethesignalpathetime,expressgeneresulttoproliferationofosteoblast. ?。踜eycsf
4、;osteoclast;osteoblast gmcsf對(duì)破骨細(xì)胞的發(fā)育有著重要作用,我們實(shí)驗(yàn)室建立了一整套的應(yīng)用gmcsf等細(xì)胞因子將源于小鼠脾干細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)成破骨細(xì)胞的技術(shù)[1,2]。.破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞彼此間相互作用,調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)的成骨和破骨作用的平衡。gmcsf介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路引起破骨細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)是否對(duì)成骨細(xì)胞產(chǎn)生影響,目前還不清楚。我們采用分組對(duì)照、細(xì)胞計(jì)數(shù)等實(shí)驗(yàn)方法對(duì)此進(jìn)行了觀察。 1材料與方法 1.1材料、試劑4~6周齡c57雌性小鼠由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供;鼠成骨細(xì)胞株mc3t3e1購(gòu)自am
5、ericantypeculturecollection公司;amem培養(yǎng)基為gibco公司產(chǎn)品;5氟尿嘧啶(5fu)購(gòu)自上海旭東海譜藥業(yè)有限公司;1,25(oh)2d3由丹麥lisebinderup博士惠贈(zèng);胎牛血清(fcs)、牛血清白蛋白(bsa)、瓊脂、il3、il6以及gmcsf均購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病學(xué)研究所?! ?.2破骨細(xì)胞的培養(yǎng)6周齡的c57雌性小鼠,按每只150mg/kg的劑量注射5fu,5天后拉頸處死。取出脾臟,制備脾細(xì)胞,將其接種于含5×104u/lil3、10-8mol/lil6、300ml/l
6、fcs及10g/lbsa的3g/lamem半固體培養(yǎng)基中,于37℃、5%co2條件下培養(yǎng)15天。形成的細(xì)胞集落,接種于含2×105u/lgmcsf和50ml/lfcs的amem培養(yǎng)液中,培養(yǎng)條件同前。然后將培養(yǎng)液換成含1×10-8mol/l1,25(oh)2d3、100ml/lfcs的amem培養(yǎng)液,上述條件再培養(yǎng)15天,于顯微鏡下觀察到破骨細(xì)胞的生長(zhǎng)。用1g/l胰酶消化細(xì)胞,在培養(yǎng)液中充分搖勻,轉(zhuǎn)種到22個(gè)培養(yǎng)皿中,于同樣條件培養(yǎng)20天。挑選出2個(gè)培養(yǎng)皿,對(duì)皿中的破骨細(xì)胞抗酒石酸鹽酸性磷酸酶染色(trap),可以更清晰地看到生
7、長(zhǎng)的破骨細(xì)胞,見(jiàn)圖1~3?! ?.3成骨細(xì)胞的培養(yǎng)將mc3t3e1細(xì)胞接種于含100ml/lfcs的amem培養(yǎng)基中,37℃、5%co2培養(yǎng)20天左右,觀察到成骨細(xì)胞生長(zhǎng)。然后用1g/l胰酶消化,在培養(yǎng)液中充分搖勻,轉(zhuǎn)種到20個(gè)培養(yǎng)皿中,于相同條件培養(yǎng)20天?! ?.4實(shí)驗(yàn)分組、培養(yǎng)與細(xì)胞計(jì)數(shù)培養(yǎng)20天的成骨細(xì)胞都充分生長(zhǎng),且30個(gè)皿內(nèi)成骨細(xì)胞長(zhǎng)勢(shì)基本相同。將30個(gè)培養(yǎng)皿隨機(jī)分為a、b和c組,每組10個(gè)平皿。a為實(shí)驗(yàn)組,b和c為對(duì)照組。將余下20個(gè)皿中生長(zhǎng)的破骨細(xì)胞,用1g/l胰酶消化并在培養(yǎng)液中混勻,平均加入到a、b組中,同時(shí)向a、
8、c組每個(gè)皿內(nèi)加入500u的gmcsf,37℃、5%co2培養(yǎng)20天。最后將培養(yǎng)皿中的細(xì)胞用胰蛋白酶消化下來(lái),顯微鏡下對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的成骨細(xì)胞計(jì)數(shù),結(jié)果進(jìn)行方差分析?! D1經(jīng)trap染色的