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《熊果酸對hl60細(xì)胞作用機(jī)制初步探究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、熊果酸對HL60細(xì)胞作用機(jī)制初步探究【摘要】目的探討熊果酸在體外對急性早幼粒白血病HL60細(xì)胞增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用。方法采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化、MTT法觀察細(xì)胞生長抑制作用、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡及周期變化。結(jié)果MTT法證實(shí)熊果酸對HL60細(xì)胞具有增殖抑制和殺傷效應(yīng)，并呈濃度和時間依賴性。顯微鏡下可見HL60細(xì)胞出現(xiàn)典型凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期。結(jié)論熊果酸在體外可抑制急性早幼粒白血病HL60細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡?！娟P(guān)鍵詞】熊果酸;HL60細(xì)胞;凋亡PrimarystudyontheeffectofUrsolicA
2、cidonHL60cellsLIJian-min，ZHOUGuo-xing，SONGHai-peng，etal.HunanTraditionalChineseMedicalCollege，Zhuzhou412000,China【Abstract】ObjectiveToinvestigateanti-proliferationandapoptosiseffectsofUrsolicAcidonHL60cells.MethodsByculturinginvitroandtreatedwithUA，anti-proliferationeffectswereassessedwithme
3、thylthiazolyltetrazolium(MTT)6colorimetricassayandmorphologyofcellswasobservedunderfluorescencemicroscope.Theflowcytometrywasusedtodetectapoptoticratesandcellcycledistribution.ResultsMTTshowedthatanti-proliferationeffectofUAonHL60Cellsinaconcentrationandtimedependentmanner.Microscopeshowedth
4、atcellpresentedsomemorphologicfeaturesofapoptosis.Theflowcytometryshowedthatafterexposuretodrugscell-cyclewasblockedatG0/G1phase.ConclusionUrsolicAcidinhibitsproliferationofHL60cellandinducesapoptosis.【Keywords】UrsolicAcid；HL60cell；Apoptosis熊果酸(ursolicacid,UA)又名烏索酸、烏蘇酸，是廣泛存在于蘆筍、白花蛇舌草、女貞子、烏梅等
5、天然植物和草藥中的五環(huán)三萜類化合物，具有抗癌、抗炎、護(hù)肝、降血脂、降糖、抗氧化和抗病毒等多種生物學(xué)活性。近來研究表明，抗腫瘤活性是熊果酸最主要的藥理作用，抗腫瘤作用具有多方面和全方位等特點(diǎn)［1］。研究證明，熊果酸對肺癌細(xì)胞A-549、胃癌SGC7901、白血病細(xì)胞P-388、L-12106和THP-1等均具有細(xì)胞毒性作用［2］，但其作用機(jī)制一直未明確。本實(shí)驗(yàn)擬用熊果酸干預(yù)處理人急性早幼粒白血病HL60細(xì)胞，體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步研究其對HL60細(xì)胞的增殖抑制、誘導(dǎo)凋亡作用及機(jī)制。1資料與方法1.1材料急性早幼粒白血病HL60細(xì)胞由南華大學(xué)藥物藥理研究所惠贈。UA為Sigma公司產(chǎn)
6、品，用二甲基亞砜(dimethylsulfoxide，DMSO)溶解，配制成1mmol/L的濃縮液，凍存于-20℃，臨用前用培養(yǎng)基稀釋并調(diào)整DMSO終濃度為0.06%。四甲基偶氮唑藍(lán)［MTT］為Amresco公司產(chǎn)品。1.2方法1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)將HL60細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。1.2.2增殖抑制實(shí)驗(yàn)HL60細(xì)胞以2×104/孔接種于96孔板,用0、10、20、40、80μmol/LUA分別處理24、48、72h后,加入5g/LMTT作用4h。4℃離心,棄上清,加入DMSO振蕩溶
7、解后,用熒光酶標(biāo)儀于570nm波長下讀取吸光度值,以0μmol/LUA組為對照組,計算增殖抑制率,增殖抑制率=［(對照組吸光度值-實(shí)驗(yàn)組吸光度值)/對照組吸光度值］×100%。1.2.3熒光顯微鏡細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察HL60細(xì)胞經(jīng)0、20、40、80μmol/LUA分別作用24h后，800g/min離心5min，收集細(xì)胞，PBS6洗滌，調(diào)整細(xì)胞數(shù)至2×105個／ml，吹打均勻，取25μl懸液加到載玻片上，加5μl吖啶橙染色后置熒光顯微鏡(波長250~350nm)觀察細(xì)胞形態(tài)。1.2.4流式細(xì)胞儀檢
