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《通腑法開通玄府對大鼠腦缺血再灌注損傷血腦屏障及腦組織水通道蛋白4 mrna的影響論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、通腑法開通玄府對大鼠腦缺血再灌注損傷血腦屏障及腦組織水通道蛋白4mRNA的影響論文胡建芳，余志輝，汪峰，黃培新，尤勁松【摘要】目的研究通腑醒神膠囊（簡稱TFXSJN）通腑法開通玄府對大鼠大腦中動脈阻塞（middlecerebralarteryocclusion，簡稱MCAO）再灌注損傷模型血腦屏障（bloodbrainbarrier，簡稱BBB）通透性及腦組織水通道蛋白4（Aquaporin-4，簡稱AQP4）mRNA表達的影響。方法采用線栓法制作大鼠MCAO模型,2h后拔線造成缺血再灌注損傷。大鼠處死前2h經(jīng)股靜脈注射伊文思藍（EvansBlue.freelR
2、NA的表達水平。結(jié)果TFXSJN治療后能明顯減輕大鼠在1，2，3d及7d時的神經(jīng)功能評分，與模型組相比有明顯差異（P0.05或P0.01）；造模后TFXSJN組、模型組腦EB含量在1，3，7d時均明顯高于假手術(shù)組（P＜0.05），1d時開始升高，3d時達高峰，7d時有所下降，但仍高于正常，其中3d時TFXSJN組EB含量明顯低于模型組（P＜0.05），1，7d時TFXSJN組EB含量均數(shù)亦低于模型組，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；TFXSJN組及模型組大鼠腦組織損傷側(cè)AQP4mRNA的表達在12h時已經(jīng)明顯升高，與健側(cè)、假手術(shù)組及正常組相比均具有顯著性差異（P0
3、.01）；模型組在3d時達高峰，TFXSJN組在2d時達高峰，3d時已有所下降，與模型組損傷側(cè)相比有明顯差異（P0.05），但仍高于健側(cè)（P0.05）。7d時兩組損傷側(cè)的AQP4mRNA表達水平基本恢復(fù)正常，與健側(cè)、假手術(shù)及正常組相比無明顯差異（P0.05）。假手術(shù)組在各時點內(nèi)其損傷側(cè)AQP4mRNA表達水平與健側(cè)及正常組相比均無明顯差異（P0.05）。結(jié)論腦急性缺血再灌注損傷時存在BBB通透性的增高和AQP4mRNA基因表達的上調(diào)。而TFXSJN通腑法開通玄府法能夠調(diào)節(jié)缺血再灌注損傷后BBB通透性增高與AQP4mRNA表達的失衡，減輕缺血再灌注損傷，從而起到神
4、經(jīng)保護作用。其調(diào)節(jié)BBB通透性與AQP4mRNA基因的異常表達可能是通腑法開通玄府治療缺血性中風的分子機制之一。因此推測玄府與BBB及細胞膜上通道蛋白（如AQP4等）之間可能存在共同的實質(zhì)內(nèi)涵?！娟P(guān)鍵詞】腑法開通玄府缺血再灌注損傷血腦屏障腦組織水通道蛋白4中醫(yī)認為中風病存在玄府郁閉的病理狀態(tài)，通腑法的目的在于開通玄府，調(diào)節(jié)玄府功能。而對于玄府本質(zhì)的認識，現(xiàn)代醫(yī)家認為玄府是機體內(nèi)最微小的腔道，在結(jié)構(gòu)及功能上體現(xiàn)了“孔”“縫隙”的內(nèi)涵實質(zhì)，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的細胞間隙十分相似，與微循環(huán)、離子通道有著許多共性內(nèi)涵［1,2］。因此，本實驗旨在研究TFXSJN通腑法開通玄府對大鼠
5、急性局灶性腦缺血再灌注損傷模型的治療作用及其對BBB通透性和神經(jīng)細胞膜上AQP4mRNA基因表達的影響，試圖從調(diào)節(jié)BBB通透性及細胞膜上通道蛋白表達的異常來詮釋通腑法開通玄府治療急性缺血性中風的可能作用機制，探討通腑法開通玄府與BBB及神經(jīng)細胞膜上通道蛋白之間的相關(guān)性，有助于從現(xiàn)代科學(xué)的微觀指標解釋通腑法的實質(zhì)內(nèi)涵，為中風病的現(xiàn)代化研究及中西結(jié)合找到切入點和開拓新思路。1材料與儀器1.1動物及藥物SPF級雄性SD大鼠，體重250～300g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供（合格證編號：0014930）。TFXSJN由廣東省中醫(yī)院制劑科提供（由番瀉葉、虎杖、人工牛
6、黃、天竺黃、栝蔞仁等藥物組成）。1.2材料及試劑TRIZOL(美國sigma公司產(chǎn)品)、DEPC(美國sigma公司產(chǎn)品)、玻璃勻漿器、1.5mlEppendorf管、氯仿、異丙醇、無水乙醇、2％伊文思藍、甲酰胺、超低溫離心機(BECKMANQS-15RCentrifuge)、螺旋振蕩器、－70℃冰箱、紫外分光光度計(Ultrospec4000)、1.5%瓊脂糖凝膠、SSIII逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Invitrogen公司產(chǎn)品)、PCR擴增試劑盒(北京天為時代公司產(chǎn)品)、AQP-4上、下游引物及探針（序列參考相關(guān)文獻，由上海生工合成）、PE7000全自動熒光定量PCR儀
7、。2方法2.1分組與給藥SPF級雄性SD大鼠138只，體重250～300g。隨機分為正常組（n＝6）、假手術(shù)組（n＝36）、模型組（n＝48）、TFXSJN組（n＝48）。TFXSJN按大鼠1.5g/kg·d計算藥量，按動物系數(shù)折算，相當于70kg成人臨床劑量的3倍。均于術(shù)前一天及術(shù)后麻醉清醒后，每日分兩次灌胃給藥（TFXSJN組）或者蒸餾水（正常組，假手術(shù)組，模型組），2ml/次，上下午各1次。各組動物如有死亡應(yīng)及時補充。2.2MCAO缺血再灌注大鼠模型建立大鼠MCAO模型制作參照koizumi線栓法［3］，從右側(cè)頸總動脈（moncarotidartery，簡
8、稱CCA）進線，栓線采用
