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1、通腑法開通玄府對大鼠腦缺血再灌注損傷血腦屏障及腦組織水通道蛋白4mRNA的影響作者：胡建芳，余志輝，汪峰，黃培新，尤勁松【摘要】 目的研究通腑醒神膠囊（簡稱TFXSJN）通腑法開通玄府對大鼠大腦中動脈阻塞（middlecerebralarteryocclusion，簡稱MCAO）再灌注損傷模型血腦屏障（bloodbrainbarrier，簡稱BBB）通透性及腦組織水通道蛋白4（Aquaporin-4，簡稱AQP4）mRNA表達(dá)的影響。方法采用線栓法制作大鼠MCAO模型,2h后拔線造成缺血再灌注損傷。大鼠處死前2h經(jīng)股靜脈注射伊文思藍(lán)（EvansBl
2、ue，簡稱EB）并測量各組大鼠1，3d及7d時(shí)腦EB含量，以及拔線后12h，1，2，3d及7d時(shí)間點(diǎn)大鼠神經(jīng)行為評分、腦組織AQP4mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果TFXSJN治療后能明顯減輕大鼠在1，2，3d及7d時(shí)的神經(jīng)功能評分，與模型組相比有明顯差異（P<0.05或P<0.01）；造模后TFXSJN組、模型組腦EB含量在1，3，7d時(shí)均明顯高于假手術(shù)組（P＜0.05），1d時(shí)開始升高，3d時(shí)達(dá)高峰，7d時(shí)有所下降，但仍高于正常，其中3d時(shí)TFXSJN組EB含量明顯低于模型組（P＜0.05），1，7d時(shí)TFXSJN組EB含量均數(shù)亦低于模型組，
3、但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；TFXSJN組及模型組大鼠腦組織損傷側(cè)AQP4mRNA的表達(dá)在12h時(shí)已經(jīng)明顯升高，與健側(cè)、假手術(shù)組及正常組相比均具有顯著性差異（P<0.01）；模型組在3d時(shí)達(dá)高峰，TFXSJN組在2d時(shí)達(dá)高峰，3d時(shí)已有所下降，與模型組損傷側(cè)相比有明顯差異（P<0.05），但仍高于健側(cè)（P<0.05）。7d時(shí)兩組損傷側(cè)的AQP4mRNA表達(dá)水平基本恢復(fù)正常，與健側(cè)、假手術(shù)及正常組相比無明顯差異（P>0.05）。假手術(shù)組在各時(shí)點(diǎn)內(nèi)其損傷側(cè)AQP4mRNA表達(dá)水平與健側(cè)及正常組相比均無明顯差異（P>
4、0.05）。結(jié)論腦急性缺血再灌注損傷時(shí)存在BBB通透性的增高和AQP4mRNA基因表達(dá)的上調(diào)。而TFXSJN通腑法開通玄府法能夠調(diào)節(jié)缺血再灌注損傷后BBB通透性增高與AQP4mRNA表達(dá)的失衡，減輕缺血再灌注損傷，從而起到神經(jīng)保護(hù)作用。其調(diào)節(jié)BBB通透性與AQP4mRNA基因的異常表達(dá)可能是通腑法開通玄府治療缺血性中風(fēng)的分子機(jī)制之一。因此推測玄府與BBB及細(xì)胞膜上通道蛋白（如AQP4等）之間可能存在共同的實(shí)質(zhì)內(nèi)涵。【關(guān)鍵詞】腑法開通玄府缺血再灌注損傷血腦屏障腦組織水通道蛋白4中醫(yī)認(rèn)為中風(fēng)病存在玄府郁閉的病理狀態(tài)，通腑法的目的在于開通玄府，調(diào)節(jié)玄府功能
5、。而對于玄府本質(zhì)的認(rèn)識，現(xiàn)代醫(yī)家認(rèn)為玄府是機(jī)體內(nèi)最微小的腔道，在結(jié)構(gòu)及功能上體現(xiàn)了“孔”“縫隙”的內(nèi)涵實(shí)質(zhì)，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的細(xì)胞間隙十分相似，與微循環(huán)、離子通道有著許多共性內(nèi)涵［1,2］。因此，本實(shí)驗(yàn)旨在研究TFXSJN通腑法開通玄府對大鼠急性局灶性腦缺血再灌注損傷模型的治療作用及其對BBB通透性和神經(jīng)細(xì)胞膜上AQP4mRNA基因表達(dá)的影響，試圖從調(diào)節(jié)BBB通透性及細(xì)胞膜上通道蛋白表達(dá)的異常來詮釋通腑法開通玄府治療急性缺血性中風(fēng)的可能作用機(jī)制，探討通腑法開通玄府與BBB及神經(jīng)細(xì)胞膜上通道蛋白之間的相關(guān)性，有助于從現(xiàn)代科學(xué)的微觀指標(biāo)解釋通腑法的實(shí)質(zhì)內(nèi)涵，為
6、中風(fēng)病的現(xiàn)代化研究及中西結(jié)合找到切入點(diǎn)和開拓新思路?！ ?材料與儀器 1.1動物及藥物SPF級雄性SD大鼠，體重250～300g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供（合格證編號：0014930）。TFXSJN由廣東省中醫(yī)院制劑科提供（由番瀉葉、虎杖、人工牛黃、天竺黃、栝蔞仁等藥物組成）?！ ?.2材料及試劑TRIZOL(美國sigma公司產(chǎn)品)、DEPC(美國sigma公司產(chǎn)品)、玻璃勻漿器、1.5mlEppendorf管、氯仿、異丙醇、無水乙醇、2％伊文思藍(lán)、甲酰胺、超低溫離心機(jī)(BECKMANQS-15RCentrifuge)、螺旋振蕩器、－70
7、℃冰箱、紫外分光光度計(jì)(Ultrospec4000)、1.5%瓊脂糖凝膠、SSIII逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Invitrogen公司產(chǎn)品)、PCR擴(kuò)增試劑盒(北京天為時(shí)代公司產(chǎn)品)、AQP-4上、下游引物及探針（序列參考相關(guān) 3結(jié)果 3.1各組大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能評分比較根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)，清醒后予以評分，評分在1～4分的大鼠為納入對象。結(jié)果表明假手術(shù)組大鼠在各個(gè)時(shí)點(diǎn)均未出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺損癥狀。TFXSJN組及模型組大鼠在拔線時(shí)的神經(jīng)功能缺損評分無明顯差異（P>0.05）。而1，2，3d及7d時(shí)TFXSJN組大鼠的神經(jīng)功能缺損評分明顯低于對照組（P
8、<0.05或P<0.01）。結(jié)果見表1。表1兩組大鼠在不同時(shí)點(diǎn)神經(jīng)功能缺損評分比較（略） 3.
