酵母成分中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

《酵母成分中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、河南化工·58·HENANCHEMICALINDUSTRY2011年6月第28卷第6期(下)酵母成分中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定竇明，李博(鶴壁職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南鶴壁458030)【摘要】對(duì)酵母抽提物中蛋白質(zhì)的快速、簡(jiǎn)易測(cè)定方法的進(jìn)行了研究。經(jīng)實(shí)驗(yàn)分析，雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)最小檢測(cè)含量至1．5g／L，平行相對(duì)偏差較小，此法操作簡(jiǎn)便，適合實(shí)驗(yàn)室快速測(cè)定?！娟P(guān)鍵詞】酵母；抽提物；蛋白質(zhì)；測(cè)定【中圖分類(lèi)號(hào)】0657．32【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1003—3467(2011)12—0058—02酵母抽提物主要成分為蛋白質(zhì)、海藻糖、多種氨2結(jié)果與討論基酸等，其成分復(fù)雜，根據(jù)蛋白質(zhì)的性質(zhì)和成分，測(cè)定

2、蛋白質(zhì)含量的方法有兩種j：一種是利用蛋白質(zhì)2．1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制的共性，即含氮量、肽鍵和折射率測(cè)定蛋白質(zhì)含量；取6支試管分別加入0、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0另一種是利用蛋白質(zhì)中特定氨基酸殘基、酸堿性基mL標(biāo)準(zhǔn)牛白蛋白溶液，加蒸餾水至1mL，加入4mL團(tuán)和芳香基團(tuán)測(cè)定其含量。由于酵母抽提物中除蛋雙縮脲試劑搖勻，在波長(zhǎng)550nm處測(cè)定光密度。以白氮外，還有氨基酸等含氮物質(zhì)，故凱氏定氮法L2J蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，光密度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲不適于作為本實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法，需對(duì)蛋線(xiàn)。其結(jié)果如表1、圖1。白質(zhì)的快速、簡(jiǎn)易測(cè)定方法進(jìn)行研究。表1蛋白含量和光密度關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)溶液體積／m

3、L00．20．40．60．81．01材料和方法蛋白含量／g·L～01．83．65．47．29．01．1試劑和設(shè)備0D0．08O．10O．210．31O．41O．50酵母抽提物，湖北安琪酵母公司；牛白蛋白(BSA)、硫酸銅、酒石酸鉀鈉(AR)，中國(guó)醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑公司；微型高速離心機(jī)，南京實(shí)驗(yàn)儀器廠；721分光光度計(jì)，上海第三分析器廠。毽鰱1．2實(shí)驗(yàn)方法瑚試劑配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)牛白蛋白1．00g(蛋白質(zhì)含量90％)加蒸餾水至100mL，配制成10L的標(biāo)準(zhǔn)牛白蛋白溶液。雙縮脲試劑L3J：0．75g五水硫酸銅和3g酒石蛋rI質(zhì)’量／g’IJ_1酸鉀鈉溶于250mL蒸餾水中，加人40％氫

4、氧化鈉圖l蛋白光密度標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液37．5mL，搖勻定容至500mL。該標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性較好，可作為酵母抽提物中蛋測(cè)定：取酵母抽提物溶液0．5mL，加蒸餾水至1白質(zhì)含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。mL，再加4mL雙縮脲試劑，搖勻靜置。20min，在2．2酵母抽提物蛋白質(zhì)含量測(cè)定550nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度L4J，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查得蛋稱(chēng)酵母9．154g，加蒸餾水定容至100mL，取三白質(zhì)含量。支試管，分別取該溶液各0．5mL，加蒸餾水至1mL，收稿日期：201l—O6一l9作者簡(jiǎn)介：竇明(1974一)，男，講師，從事化學(xué)研究工作，E—mail：yanghongxia5886063@163．tom。河南化

5、工2011年6月第28卷第6期(下)HENANCHEMICALINDUY·59·再加4mL雙縮脲試劑，搖勻，靜置20min后，在測(cè)定結(jié)果相對(duì)偏差小于3％，說(shuō)明測(cè)定方法準(zhǔn)確，相550nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查得蛋白對(duì)誤差較?。坏鞍踪|(zhì)含量小于1．5g／L，相對(duì)偏差較質(zhì)含量，結(jié)果如表2所示。大，準(zhǔn)確度相對(duì)較差。在整個(gè)測(cè)定范圍內(nèi)，對(duì)測(cè)得的表2樣品中蛋白質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果蛋白質(zhì)含量和酵母抽提物濃度進(jìn)行線(xiàn)性擬合得直線(xiàn)如圖2?！瘛蓿芙Y(jié)果可知，蛋白質(zhì)含量為9．06g／L，相對(duì)偏差小d菩打于2％，準(zhǔn)確度較高，換算到酵母抽提物蛋白質(zhì)含量壤二為9．90％。日2．3酵母濃度對(duì)蛋白質(zhì)含量測(cè)定的影響稱(chēng)

6、酵母9．241g，加蒸餾水搖勻定容至100mL，取配制的溶液分別稀釋1～5倍，各取0．5mL，加蒸餾水至1mL，再加雙縮脲試劑4mL，搖勻靜置20圖2蛋白質(zhì)含量和酵母抽提物濃度關(guān)系曲線(xiàn)min后在550nm處測(cè)定光密度，求其平均含量和相由圖可知，蛋白質(zhì)含量和酵母抽提物近似線(xiàn)性對(duì)偏差，結(jié)果如表3所示。關(guān)系，故可用雙縮脲法對(duì)不同酵母抽提物溶液中蛋表3酵母抽提物濃度與蛋白質(zhì)含量白質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定。3小結(jié)凱氏定氮法是經(jīng)典測(cè)定總氮的方法，準(zhǔn)確、精密度高，但程序繁瑣，費(fèi)時(shí)長(zhǎng)，有非蛋白氮干擾時(shí)測(cè)定偏差大；雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)最小檢測(cè)含量至1．5g／L，平行相對(duì)偏差較小，此法操作簡(jiǎn)便，適合實(shí)驗(yàn)室快速測(cè)

7、定。參考文獻(xiàn)：[1]馬增春，高月，呂俊萍，等．雙向凝膠電泳中三種蛋白質(zhì)檢測(cè)方法的比較[J]．中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2004，(4)：129—134．[2]王宗乾，程龍，邱小永，等．凱氏定氮法測(cè)定牛奶纖維蛋白質(zhì)含量[J]．印染，2008，(12)：35—37．[3]郭穎娜，孫衛(wèi)．蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法的比較[J]．河北化工，2o08，(4)：40—41．[4]沈萍萍，王朝輝，齊雨藻，等．光密度法測(cè)定微藻生物量[J]．暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版)，2001，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，蛋白