再障骨髓片檢查

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1、再障的骨髓片檢查詳細內(nèi)容：一、制片骨髓涂片制作方法與血片制作方法基本相同，但因有骨髓小粒和脂肪滴，有核細胞較多，因此較血液粘稠，推片略難于血片，推片時角度要小一些，速度要慢一些，避免骨髓片過厚。二、染色傳統(tǒng)的骨髓涂片染色方法多用在Romanowsky染色基礎(chǔ)上改良而成的Wright和Giemsa染色法。20世紀70年代，顯微分光光度計和電子計算機的廣泛應用，傳統(tǒng)的形態(tài)學描述已開始被精確科學的數(shù)字所取代，常規(guī)的骨髓細胞染色方法也隨之被重新研究和改良，形成了一些新改良的骨髓細胞染色方法。目前，臨床常用的染色方法主要有：（一）瑞氏(Wright)染色Ⅰ液：瑞氏染料(伊紅

2、、美藍)1.0g，AR級以上甲醇600ml，甘油15ml。Ⅱ液：磷酸鹽緩沖液(pH6.4~6.8)使用時滴加Ⅰ液3~5滴0.5~1min后滴加等量Ⅱ液，染5~10分鐘（二）吉姆薩(Giemsa)染色Ⅰ液：吉姆薩染料(伊紅、天青)1.0g，甲醇66ml，甘油66ml。Ⅱ液：磷酸鹽緩沖液(pH6.4~6.8)使用時用Ⅱ液將Ⅰ液稀釋10-20倍，染色10~30min。（三）Marshall提出的標準化的Romanowsky染色Ⅰ液：美藍9.0mg，天青B(thiocyanate)17.0mg，伊紅13.0mg溶解于20ml1:1甘油甲醇。Ⅱ液：0.00132M的sore

3、nsen磷酸鹽緩沖液(pH6.4~6.8)，使用時將Ⅰ液用100mlⅡ液稀釋，染色10min。(四)R-G(Romanowsky-Giemsa)染色Ⅰ液：天青B130mg，伊紅Y65mg分別溶解于50ml甲醇作為貯存液。Ⅱ液：0.00132M的sorensen磷酸鹽緩沖液(pH6.4-6.8)使用時將Ⅰ液用Ⅱ液稀釋，染色10min。(五)wittekind1987年介紹的R-G染色Ⅰ液：天青B750mg溶于75mlDMSO，伊紅Y120mg溶于25mlDMSO混合作為貯存液。Ⅱ液：1:25V/VpH6.5HEPES緩沖液。使用時將Ⅰ液用Ⅱ液稀釋，染色15~35mi

4、n。三、骨髓涂片、染色的質(zhì)量保證涂片和染色過程中應該注意的問題主要有：1．載玻片要潔凈，手指不要觸及玻片表面。2．穿刺后立即涂片并送檢，避免血液凝固同時保證骨髓涂片在新鮮狀態(tài)下染色。如遇特殊情況，陳舊玻片再染色時間不宜超過一周，以免蛋白質(zhì)變性，染色偏堿和形態(tài)變異。3．涂片一般不用抗凝劑以免影響細胞形態(tài)。4．涂片時注意保留片尾和邊緣，因體積較大的細胞多在此處。5．應取骨髓小粒多的骨髓液制作涂片，至少要6～10張，自然干燥。6．涂片制成后，應在空氣中快速搖動或吹干，防止細胞皺縮或溶血。7．骨髓涂片固定和染色的時間要較血片略長，最好放在低倍鏡下觀察，待染色滿意時再沖洗。

5、8．若染色過淺，可于涂片干燥后重染，如染色太深可于干燥后滴加甲醛數(shù)滴，稍停后沖洗四、骨髓涂片檢查的內(nèi)容及程序(一)檢查步驟（骨髓涂片檢查）1．低倍鏡檢查(1)觀察涂片情況　觀察涂片制作及染色是否滿意，取材是否是真正的骨髓液等。若取材不好、涂片過厚、染色較差，則分類計數(shù)結(jié)果將不可靠，甚至造成誤導，應另選涂片、染色較好的骨髓片進行檢查，或重新取材。(2)判斷有核細胞增生程度　低倍鏡下選擇細胞分布均勻部位觀察骨髓片有核細胞增生情況，根據(jù)骨髓片中有核細胞的密度或有核細胞與成熟紅細胞的比例來估計有核細胞的增生程度。對增生減低的標本，應觀察全部送檢骨髓片，以免漏檢有代表性的標

6、本。骨髓有核細胞增生程度通常分為五級，見表2-2-1。當增生程度介于兩級之間時，則將結(jié)果劃為上一級。例如在增生活躍與增生明顯活躍之間時，可判斷為增生明顯活躍。在臨床上這種增生程度的判斷在很大程度上靠檢查者的經(jīng)驗來估計。骨髓增生程度的判斷受骨髓取材好壞的影響很大，一般來說，只有當涂片中存在骨髓小粒時才宜于估計其增生程度，所以在骨髓穿刺時，最好將多余的穿刺液收集起來制作病理切片，通過組織切片觀察骨髓小粒中的造血細胞多少更具有真實性和可靠性。表,骨髓有核細胞增生程度五級估計標準(3)觀察全片巨核細胞的數(shù)量　巨核細胞數(shù)量變化較大，一張骨髓涂片上可有7~133個，平均36個

7、。如將骨髓膜標準化為1.5cm×3.0cm(4.5cm2)，則參考值為7~35個。在一般的骨髓檢查報告單上可憑經(jīng)驗分為易找到、不易找到、增多三級記述。但在巨核細胞明顯增多或疑為特發(fā)性血小板減少性紫癜時，則應作全片巨核細胞計數(shù)，并作分類。即在低倍鏡下每見到一個巨核細胞，即用高倍鏡或油鏡確定其發(fā)育階段和有無血小板形成，至少觀察25個巨核細胞。(4)觀察骨髓片邊緣和尾部　注意尋找有無體積較大的或成堆的特殊病理細胞，如轉(zhuǎn)移癌細胞、多核細胞、尼曼-匹克細胞、戈謝細胞、Reed-Stemberg細胞、海藍組織細胞等。2.油鏡檢查在低倍鏡觀察的基礎(chǔ)上，選擇較滿意的片膜段，換用油

8、鏡觀察。從