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1、大孔吸附樹脂純化馬錢子總生物堿的工藝研宄作者：管慶霞，王錄娜，李永吉，楊志欣，王銳【摘要】目的研究大孔樹脂純化馬錢子總生物堿的工藝條件，為馬錢子總生物堿的工業(yè)化生產提供實驗依據。方法以吸附量及解吸率為指標考察了AB-8，D101，HPD-500和LSA-10等4種型號的樹脂，確定純化馬錢子總生物堿的最佳樹脂。并通過單因素分析考察該樹脂分離、純化馬錢子總生物堿的最佳工藝條件。結果AB-8型大孔吸附樹脂對馬錢子總生物堿具有較好的分離能力。通過大孔樹脂分離純化后，馬錢子樣品總生物堿的純度可迗70%，洗脫率可迗到90%以上。結論AB-8大孔吸附樹脂綜合性能較好,適合于
2、馬錢子總生物堿的分離純化?！娟P鍵詞】馬錢子總生物堿大孔吸附樹脂純化馬錢子為馬錢科植物馬錢Strychnosnux-vomicaL.的干燥成熟種子［1］，具有通絡止痛、散結消腫的功效，在我國有悠久的藥用歷史，療效顯著、確切，為歷代醫(yī)家所推崇?，F代研究證明其主要含總生物堿。因此，分離純化馬錢子總生物堿具有重要的意義。大孔吸附分離技術是目前應用較廣的一種中藥深加工技術，具有物理化學穩(wěn)定性高、比表面積大、吸附容量大、選擇性好、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、使用周期長、宜于構成閉路循環(huán)、節(jié)省費用等諸多優(yōu)點［2］，已被廣泛應用于中草藥有效成分的分離純化。但馬錢子
3、總生物堿的大孔吸附樹脂的富集，分離和純化尚未見報道。本實驗選擇4種大孔吸附樹脂分離馬錢子總生物堿，以士的寧和馬錢子堿為定量指標，篩選出最佳的樹脂、洗脫溶劑及用量，以達到開發(fā)相應制劑的要求。1儀器與試藥Waters2695-2996高效液相色譜儀，含有在線脫氣、高壓四元梯度泵、恒溫自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器、Empower色譜工作站；HY-4型調速多用振蕩器；AB265-S電子分析天平為色譜純；水為娃哈哈純凈水；其它試劑均為分析純。士的寧、馬錢子堿對照品；大孔吸附樹脂AB-8.D101；LSA-1O;流動相為甲醇水乙酸三乙胺；流速l.Oml/min檢測
4、波長254nm;柱溫30°C。標準曲線的繪制精密稱取士的寧對照品6mg,馬錢子堿對照品5mg定容置同一25ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。分別精密移取，，，，ml至10ml容量瓶中，用甲醇定容，搖勻。精密吸取lOul，注入液相色譜儀。以峰面積(A)為縱坐標，對照品濃度(C)為橫坐標作圖，得標準曲線?；貧w方程為：士的寧A=-87369+22961C,r=8馬錢子堿A=-69869+12255C，r=7結果表明，士的寧濃度在24?120ug/ml,馬錢子堿濃度在20?100ug/m1范圍內與峰面積呈良好線性關系。樣品溶液制備馬錢子藥材用6倍量pH=5，50%的乙醇
5、溶液提取3次，回流提取2h/次，合并3次濾液，抽濾。減壓濃縮回收至無醇味，加水稀釋到適當濃度備用。大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附和解吸試驗考察樹脂預處理大孔樹脂分別用95%乙醇浸泡24h,充分溶脹用乙醇洗至溶液加適量蒸餾水無白色渾濁現象時為止，最后用蒸餾水洗至無醇味，備用。靜態(tài)吸附容量測定精密量取預處理好的4種大孔吸附樹脂lg加入馬錢子樣品液30ml中，密封置于振蕩器（25°C，100次/min）中振蕩，充分吸附，12h后從上清液中取樣，檢測溶液中總生物堿含量的變化，計算飽和吸附量。結果見表1。靜態(tài)解吸試驗分別將上述充分吸附了馬錢子總生物堿的4種樹脂進行過濾，除去水液，
6、再將其置于具塞錐形瓶中，加入95%乙醇溶液30ml密封，置恒溫振蕩器中進行解吸，12h后從上清液中取樣，檢測總生物堿含量變化，計算解吸率。結果見表1。飽和吸附量=［（初始濃度-吸附后濃度）X吸附液體積］/樹脂重量解吸率（%）=［洗脫液濃度X洗脫液體積］/飽和吸附量X100%由表1中數據可見，樹脂AB-8對馬錢子中總生物堿的吸附、解吸附性能最優(yōu)，所以選擇AB-8型樹脂對馬錢子進行純化。表14種大孔樹脂的靜態(tài)飽和吸附量及解吸率靜態(tài)吸附動力學特征取AB-8樹脂lg加入100ml（g生藥/ml）馬錢子樣品溶液中，室溫條件下靜置12h,使其達到飽和吸附，靜置期間，每隔一
7、定時間吸取上層液測定士的寧、馬錢子堿的含量。以吸附時間為橫坐標，吸附量為縱坐標，繪制吸附動力學曲線，見圖1?？梢?，各成分在起始階段吸附速率較大，2h后士的寧、馬錢子堿含量增加緩慢。AB-8樹脂對純化馬錢子總生物堿的工藝研究最大上樣量的考察將一定濃度的馬錢子樣品液150ml緩慢加入裝有15m1AB-8樹脂的玻璃柱中，流速為l.Oml/min,每樹脂床體積洗脫劑濃度的考察將4份各已吸附好5ml馬錢子提取液（lg生藥/ml）的AB-8樹脂10ml,先用水洗至無色，再分別用30%,50%,70%,90%的乙醇溶液作為洗脫液，洗脫5倍柱體積，洗脫液流速為l.Oml/mi
8、n。以士的寧、馬錢子的含量為評價指標，
