簡(jiǎn)述核酸疫苗制備過程

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1、簡(jiǎn)述核酸疫苗制備過程核酸疫苗乂稱基因疫苗，是指將編碼某種抗原蛋a的外源直接導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞，在宿主細(xì)胞屮表達(dá)并合成抗原蛋白，并激起機(jī)體一系列類似于疫苗接種的免疫應(yīng)答?，起到預(yù)防和治療疾病的0的。自1990年Wolff等人意外發(fā)現(xiàn)核酸疫苗盾，其相關(guān)的研究得到了廣泛的重視，并得以迅速發(fā)展，譽(yù)為“第三次疫苗革命”。本文就核酸疫苗的構(gòu)建、特性、免疫機(jī)制、接種方式、影響因素、研究現(xiàn)狀和前景作一綜述。核酸疫苗是由編碼病原體抗原的基因和作為真核細(xì)胞表達(dá)載體的質(zhì)粒DNA組成。病原體抗原的編碼基因可以是一組相關(guān)基因或單一病原體免疫保護(hù)性抗原基因，也可以是編碼抗原決定

2、簇的一段DNA序列，其表達(dá)產(chǎn)物應(yīng)是病原體的有效成分，可以引發(fā)保護(hù)性免疫。用于構(gòu)建核酸疫苗的載體質(zhì)粒多以pUC或pBR322質(zhì)粒為基本骨架，主要包括啟動(dòng)子、増強(qiáng)子和3’端多聚A。巨細(xì)胞病毒（CMV）啟動(dòng)了和ROUS肉瘤病毒（RSV）的啟動(dòng)子都可在哺乳類細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。另外也有人采用來(lái)自哺乳動(dòng)物和禽類的啟動(dòng)子。Fynan等1993年將編碼流感病毒血凝素H或H7的CDNA片段插入CMV質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件的下游，構(gòu)建了抗流感病毒的核酸疫苗，另外，乙型肝炎病毒、人免疫缺陷綜合癥病毒、腦膜炎病毒等基因均被成功地克隆到含CMV啟動(dòng)子的真核表達(dá)載體上，并表現(xiàn)了免疫

3、活性。用丁*構(gòu)建核酸疫苗的病毒載體包括流感病毒載體、腺病毒載體、腺病毒相關(guān)載體、脊髓灰質(zhì)炎病毒等。1994年Castrucci-MR[6]把可以引起保護(hù)性免疫反應(yīng)的致死性淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒（LCMV）的表位基因片段克隆到流感病毒（H1N1）的基岡組屮制備核酸疫苗，免疫小鼠后，可使小鼠抵抗致死性淋巴細(xì)胞脈絡(luò)從腦膜炎病毒的攻擊，其免疫效果可維持4個(gè)；J以上。二核酸疫苗的特點(diǎn)與傳統(tǒng)的滅活疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗和比，核酸疫苗具有如下特點(diǎn):（1）免疫效果好，基因疫苗能在宿主細(xì)胞屮產(chǎn)生外源性蛋白，此種蛋白比原核生物表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生的蛋白更象天然分

4、子，其抗原識(shí)別遞呈過程與自然感染十分相似，從而引起幾乎等同于感染這些病原體或弱毒疫苗免疫肜所產(chǎn)生的免疫極答，并且避免了基因重組技術(shù)在體外合成的蛋白質(zhì)抗原表位丟失或改變。（2）利用一種表達(dá)載體同時(shí)表達(dá)多種蛋a，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)多種病原體的免疫應(yīng)答，從而起到一次注射核酸疫苗同吋預(yù)防和治療多種疾病的效果，并可抵抗某些變異病原體的侵襲（3）核酸疫苗接種后，蛋內(nèi)質(zhì)抗原在宿主細(xì)胞可直接與MHCI類和MHCII類分了結(jié)合，引起廣泛的細(xì)胞免疫和體液免疫，但無(wú)毒力返祖的危險(xiǎn)（4）安全性好，由于核酸疫苘一般采用表達(dá)載體在動(dòng)物細(xì)胞體內(nèi)進(jìn)行抗原表達(dá)，不與宿主染色體DN

5、A整合，但能在宿主體內(nèi)表達(dá)，與病毒活疫苗和比，避免Y病毒木身存在的復(fù)毒和病毒基岡組整合到宿主染色體的危險(xiǎn)（5）核酸疫茁具冇共同的理化特性，可在同一載體上構(gòu)建表達(dá)多種抗原，生產(chǎn)多價(jià)疫苗或同時(shí)注射2種以上的核酸疫苗來(lái)進(jìn)行聯(lián)合免疫（6）制備簡(jiǎn)單，利用成熟的基因重組技術(shù)，將克隆的目的基因DNA直接接種，避免了表達(dá)載體的構(gòu)建，表達(dá)產(chǎn)物的提取等繁瑣過程（7）由于核酸疫苗作為重組質(zhì)粒，能在工程菌內(nèi)快速大量增殖，且提取方法簡(jiǎn)便，可使生產(chǎn)成木降低，并能加工干燥，便于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸。三核酸疫苗免疫機(jī)理對(duì)核酸疫苗免疫機(jī)理說法不一，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，其致病機(jī)理在于他模擬了病

6、毒的自然感染過程。DNA質(zhì)粒在注射部位被肌細(xì)胞吸收攝取后，通過所含的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子系統(tǒng)調(diào)節(jié)合成所編碼的蛋內(nèi)質(zhì)，合成的蛋白質(zhì)被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶復(fù)合體降解成含病毒抗原表位的肽段，進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與合成MHCI類分子結(jié)合，然后被轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)遞呈到細(xì)胞膜表而，此復(fù)合體共同激活CD8+CTL,部分被分泌或釋放入血的蛋ITJ質(zhì)，激活特異性B細(xì)胞，從而產(chǎn)生保護(hù)性抗體；另外，分泌的蛋白質(zhì)被巨噬細(xì)胞或樹突狀細(xì)胞等專職抗原遞呈細(xì)胞俘獲，被加工成肽段，進(jìn)入溶酶體/內(nèi)體區(qū)與MHCII類分子結(jié)合，激活受MHCII類分子限制的CD4+Th細(xì)胞，被激活的Th細(xì)胞分泌IFN—Y、IL-2等

7、細(xì)胞因子，，進(jìn)一步促進(jìn)和強(qiáng)化體液免疫和細(xì)胞免疫。另外，試驗(yàn)證明質(zhì)粒上的氨芐青霉素抗性選擇基因屮的文結(jié)構(gòu)5’-AACGTT-3,能夠使單核細(xì)胞產(chǎn)生0細(xì)胞介素-12,刺激細(xì)胞分泌干擾素，增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性，稱為“單鏈免疫刺激DNA序列”起到佐劑的作用。!1!核酸疫苗可以通過多種方式、途徑接種到機(jī)體的適當(dāng)部位，不同的接種方式或途徑可影響其免疫效果。接種途徑依啟動(dòng)子的來(lái)源而有所區(qū)別，用動(dòng)物病毒和一般哺乳動(dòng)物扁動(dòng)子構(gòu)建的DNA疫苗一般用生理鹽水稀釋質(zhì)粒DNA肌肉注射法，如股四頭肌和腓腸肌等骨骼肌兇為其特殊結(jié)構(gòu)如肌漿網(wǎng)、橫旳微管系統(tǒng)，適合于攝取和表達(dá)DNA

8、,兼之其注射方便，因而常被選為接種組織，也可選擇肌肉皮下、腹腔內(nèi)、靜脈內(nèi)接種。血用來(lái)自乳腺的乳清酸蛋白(WAP)啟動(dòng)子構(gòu)建的疫苗在乳腺和皮下脂肪接種效