正交試驗(yàn)法優(yōu)選和丹舒膠囊提取工藝論

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　　正交試驗(yàn)法優(yōu)選和丹舒膠囊提取工藝論【摘要】目的優(yōu)選復(fù)方和丹舒膠囊中藥材的最佳提取工藝。方法采用正交設(shè)計(jì)法，以水、醇2組提取物中浸膏得率、有效成分(分別為丹參酮ⅡA和黃芪甲苷)提取率為指標(biāo)，確定提取參數(shù)。結(jié)果確定黃芪等水溶組藥材采用水提，工藝為8倍量水，煎煮3次，每次1.5h;經(jīng)水提丹參藥渣等采用醇提，工藝為6倍量60%乙醇，提取2次，分別提取2.0、1.5h。結(jié)論優(yōu)選的和丹舒膠囊提取工藝穩(wěn)定、可行，提取率高?！娟P(guān)鍵詞】和丹舒膠囊;丹參酮ⅡA;正交設(shè)計(jì);黃芪甲苷;提取工藝OptimizationoftheextractionprocessofHedanshucapsulesbyorthogonaldesign　　ZHANGShu瞝ing1，SHAMei1，LUJun2，XIAChao2　　(1.DepartmentofPharmacy,FujianCollegeofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou,Fujian350108,China;2.JiangsuProvinceInstituteofMaterialMedica,Nanjing,Jiangsu210009,China)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheoptimalextractionforpoundHedanshucapsules. MethodsOrthogonaltestalconditionforextractingRadixAstragaligroupountofes,1.5hourseachtimeandtheoptimalconditionforextractingRadixSalviaeMiltiorrhizaegroupountof60%alcohol,2times,2.0hoursand1.5hourseachtime.ConclusionTheoptimizedextractivetechnologyisreproduciableandefficient32色譜工作站;SartoiousBT25S型電子分析天平(北京賽多利斯儀器有限公司);恒溫干燥箱(北京市朝陽區(qū)來廣營醫(yī)療器械廠);DK睸24型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司)。丹參、黃芪等實(shí)驗(yàn)藥材均購自福建同春藥業(yè)有限公司，經(jīng)福建中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系劉小芬講師鑒定符合2005版中國藥典(一部)有關(guān)規(guī)定;丹參酮ⅡA對(duì)照品(批號(hào)110766200416)、黃芪甲苷對(duì)照品(批號(hào)110781200512)由中國藥品生物制品檢定所提供;甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純?！　?方法與結(jié)果　　2.1水煎煮組正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)采用正交試驗(yàn)法對(duì)黃芪、丹參等藥水提工藝進(jìn)行優(yōu)選。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[2]，以提取次數(shù)(A)、提取時(shí)間(B)、加水量(C)為試驗(yàn)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平進(jìn)行優(yōu)選，以浸膏得率和黃芪甲苷含量作為考察指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)。因素水平見表1。表1水煎煮組的因素水平表論文代寫 　　2.2浸膏得率測(cè)定精密吸取母液20mL，置干燥恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，迅速取出，放入干燥器中，冷卻30min，迅速精密稱定，計(jì)算出膏率。　　2.3水煎液中黃芪甲苷含量測(cè)定[3]　　2.3.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱：DiamonsilTM色譜柱(4.6mm250mm，5μm);流動(dòng)相：乙腈菜(體積比36∶64);流速：1.0mLmin-1;漂移管溫度：105℃;載氣流速：2.7Lmin-1。理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000，分離度大于1.5?！　?.3.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品10.16mg，置10mL容量瓶中，加入甲醇定容，制成1.016mgmL-1的溶液，即得?！　?.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對(duì)照品溶液0.3、0.5、1.0、2.0、3.0mL，分別置5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按2.3.1色譜條件，分別注入液相色譜儀，進(jìn)樣量為20μL，以對(duì)照品質(zhì)量的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以峰面積的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果得線性對(duì)數(shù)方程為Y=2.3157X+65.2485(r=0.9998)，表明黃芪甲苷在1.21～12.19μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。　　2.3.4供試品溶液的制備及測(cè)定按表2條件進(jìn)行提取，合并提取液，濾過，濾液濃縮至1.1 gmL-1，加乙醇使乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)75%，靜置24h，取上清液減壓回收乙醇，濃縮定容于100mL量瓶中，搖勻。分別精密量取20.0mL，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次25mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次20mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芤翰⑥D(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，離心，取上清液，即得?！　?.3.5含量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品、供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，按2.3.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算?！　?.4水煎煮組最佳工藝確定　　對(duì)正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行極差和方差分析，結(jié)果見表2、表3。表2水煎煮組正交試驗(yàn)結(jié)果注：綜合評(píng)分=(出膏率/最大出膏率)1000.4+(黃芪甲苷含量/黃芪甲苷最高含量)000.6表3水提工藝方差分析表注：F0.05(2，2)=19.000　　由表2可知，3個(gè)因素的極差大小順序?yàn)锳>C>B，提取次數(shù)對(duì)提取工藝的影響最大，其次為加水量，提取時(shí)間影響最小。由表3可知，因素A對(duì)本復(fù)方的提取有顯著性影響，因素B、C無顯著性影響。故最佳工藝為A3B1C1，即用8倍量水，提取3次，每次1.5 h。按優(yōu)選的最佳工藝提取3批樣品進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，可知，3批樣品出膏率分別為22.14%、21.09%、22.47%，黃芪甲苷含量分別為1.91、1.85、1.89mgg-1，驗(yàn)證結(jié)果表明工藝基本穩(wěn)定可行?！　?.5醇提組正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)　　根據(jù)文獻(xiàn)和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果[4]，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)乙醇濃度(A)、醇用量(B)、提取時(shí)間(C)3個(gè)試驗(yàn)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平進(jìn)行優(yōu)選，并以浸膏得率和丹參酮ⅡA含量作為考察指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)。因素水平表見表4?！　?.6丹參酮ⅡA含量測(cè)定　　2.6.1色譜條件色譜柱為HypersilODS2(4.6mm250mm，5μm);流動(dòng)相為甲醇菜(體積比82∶18);檢測(cè)波長為270nm，流速為1.0mLmin-1，柱溫為30℃。理論塔板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計(jì)算應(yīng)不低于3000?！　?.6.2對(duì)照品貯備液的制備精確稱取丹參酮ⅡA5.12mg，置5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，丹參酮ⅡA的質(zhì)量濃度為1.024mgmL-1。表4醇提組的因素水平表　　2.6.3線性關(guān)系考察精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.0mL置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取各對(duì)照品液10μL進(jìn)樣，按2.6.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以對(duì)照品的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行回歸分析，得丹參酮ⅡA回歸方程為Y=473217X+9122(r=0.9999)，線性范圍為0.1024～1.024μg。 　　2.6.4樣品溶液的測(cè)定用L9(34)正交表安排試驗(yàn)，稱取處方量的藥材，按設(shè)定方案進(jìn)行回流，收集回流提取液，定容至200mL，精密量取50mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻0.5h，迅速稱量。精密稱定，精密加入流動(dòng)相50mL，稱定重量，避光超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過。精密量取續(xù)濾液1mL，用甲醇定容于100mL容量瓶中，即得。分別精密吸取對(duì)照品、供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，按2.6.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定?！　?.7醇提組最佳工藝確定正交試驗(yàn)結(jié)果見表5，方差分析結(jié)果見表6?！　∮杀?可見，3個(gè)因素的極差大小順序?yàn)镃>A>B，提取時(shí)間對(duì)提取工藝的影響最大，醇濃度次之，醇用量影響最小。由表6可見，提取時(shí)間對(duì)提取效果有顯著性影響，醇濃度、醇用量無顯著性影響?？紤]生產(chǎn)成本，確定A1B1C3為最佳工藝，即用6倍量60%乙醇溶液，提取2次，提取時(shí)間分別為2.0、1.5h。按優(yōu)選的最佳工藝提取3批樣品進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)可知，3批樣品出膏率分別為20.24%、20.32%、19.97%，丹參酮ⅡA含量分別為0.941、0.937、0.931mgg-1，驗(yàn)證結(jié)果表明工藝基本穩(wěn)定可行。表5 醇提組正交試驗(yàn)結(jié)果注：綜合評(píng)分=(浸膏得率/最大浸膏得率)1000.4+(丹參酮ⅡA含量/丹參酮ⅡA最高含量)1000.6　表6醇提工藝方差分析表　　3討論　　丹參味苦微寒，具活血涼血、祛淤清熱之功，為本方君藥以祛淤阻。丹參主要含有兩類成分：一為脂溶性的二萜醌類，具有抗菌、抗炎及擴(kuò)張血管作用;另一類為水溶性的酚酸類化合物，具有明顯的抗凝、溶纖及很強(qiáng)的抗脂質(zhì)過氧化作用。方中黃芪則取補(bǔ)氣之功而治前列腺增生日久氣虛之候，其利水之功又可助它藥以泄?jié)瘢仕峤M以黃芪甲苷作為指標(biāo)成分。黃芪等藥味中的活性成分在水中有較好的溶解度，故考慮用傳統(tǒng)的水煎煮提取;而經(jīng)水提丹參藥渣、牛膝等藥物的有效成分在醇溶液中溶解度較大。故采用醇提與水提方法相結(jié)合，可同時(shí)對(duì)復(fù)方中藥材的脂溶性及水溶性有效成分進(jìn)行全面提取?！　≡诠┰嚻啡芤旱闹苽渖希容^了加甲醇超聲20、30min，水浴回流提取20、30、60min及加乙醚索氏提取等多種方法的提取效果。結(jié)果顯示，超聲30min、水浴回流提取20min及乙醚索氏提取3h，丹參酮ⅡA即可提取完全，甲醇提取法制得的樣品溶液較索氏提取法制得的樣品溶液所含雜質(zhì)為多，但雜質(zhì)成分對(duì)測(cè)定丹參酮ⅡA無干擾。為方便提取，故選定超聲30min進(jìn)行提取。 　　和丹舒膠囊為復(fù)方制劑，成分復(fù)雜。試驗(yàn)選擇以浸膏得率和黃芪甲苷、丹參酮ⅡA含量測(cè)定為指標(biāo)，可綜合評(píng)價(jià)提取工藝的合理性。采用正交設(shè)計(jì)的試驗(yàn)方法對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化篩選，確定的最佳提取工藝簡便、科學(xué)，符合生產(chǎn)要求?！?/p>