hplc法測(cè)定瀉痢消膠囊中芍藥苷的含量

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1、HPLC法測(cè)定瀉痢消膠囊中芍藥苷的含量關(guān)鍵詞：瀉痢消膠囊；芍藥苷；HPLC　　瀉痢消膠囊是由酒黃連、酒白芍、檳榔、澤瀉、甘草等十二味中藥加工制備而成，具有清熱燥濕，行氣止痛之功效[1]，在臨床上常用于大腸濕熱所致的腹痛泄瀉，大便不暢，下痢膿血等癥，效果顯著。原標(biāo)準(zhǔn)中只對(duì)制劑中的黃連小檗堿成分進(jìn)行了含量測(cè)定，而白芍養(yǎng)血斂陰，緩急和里，為方中要藥，目前認(rèn)為芍藥苷為白芍的有效成分，因此，本研究對(duì)制劑中的芍藥苷進(jìn)行了含量測(cè)定，為完善瀉痢消膠囊質(zhì)量控制提供一定參考。1儀器與試藥1.1儀器Agilent1100高

2、效液相色譜儀；UV1100型紫外分光光度計(jì)（上海天美科學(xué)儀器有限公司）；KQ-250型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AB135-S電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；1.2試藥芍藥苷對(duì)照品（110736-200424）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；瀉痢消膠囊（云南白藥集團(tuán)股份有限公司）購(gòu)自青島國(guó)風(fēng)藥店；甲醇、磷酸為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：KromasilC18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸（25︰75）；檢測(cè)

3、波長(zhǎng)：230nm；流速：1.0mL·min-1。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。2.2溶液的配制2.2.1對(duì)照品溶液取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解并制成每1mL含120μg的溶液，即得。2.2.2供試品溶液取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率300L，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)、即得

4、。2.2.3陰性對(duì)照溶液取白芍以外的其余藥味，制得不含白芍的空白制劑，照供試品溶液的制備方法制備，即得。2.3方法學(xué)考察2.3.1專(zhuān)屬性試驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果供試品中芍藥苷色譜峰能達(dá)到基線(xiàn)分離，且保留時(shí)間與相應(yīng)對(duì)照品一致；陰性對(duì)照溶液在相同保留時(shí)間處無(wú)吸收峰，表明其余藥味對(duì)芍藥苷的測(cè)定無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1。圖1芍藥苷對(duì)照品（A）、供試品（B）、陰性對(duì)照（C）HPLC圖2.3.2線(xiàn)性關(guān)系考察取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成

5、每1ml含242.2μg的溶液，精密量取2、4、6、8、10ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以芍藥苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為：Y=1909276.9231X–4265.72，r=0.9999。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量分別在0.4844～2.4220μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。2.3.3精密度試驗(yàn)精密吸取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)測(cè)定6次，進(jìn)樣量10μL。結(jié)果芍藥苷面積的RSD分

6、別為1.41%（n=6），表明儀器精密度良好。2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取上述供試品溶液分別于配制后的1、3、5、7、9、12h測(cè)定芍藥苷峰面積，進(jìn)樣量10μL。結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD分別為0.96%（n=6）、，表明供試品溶液在12h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。2.3.5重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次瀉痢消膠囊（批號(hào)20101004）內(nèi)容物，共6份，分別按2.2.2項(xiàng)下方法制得供試品溶液，照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量10μL。結(jié)果制劑中芍藥苷平均含量分別為12.3583mg/g，RSD為1.69%（n=6），表明

7、本含量測(cè)定方法重現(xiàn)性較理想。2.4樣品含量測(cè)定取3批樣品按供試品溶液制備法制得供試品溶液，并按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，每批樣品測(cè)定3份，結(jié)果見(jiàn)表2。表2樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）3討論3.1供試品制備方法選擇本研究對(duì)供試品制備方法進(jìn)行了篩選，甲醇液直接超聲處理，進(jìn)樣測(cè)定，雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，芍藥苷色譜峰分離不理想，進(jìn)而采用正丁醇萃取法進(jìn)行除雜處理[2]，結(jié)果供試品溶液中中芍藥苷色譜峰分離良好。3.2流動(dòng)相的優(yōu)選本研究參考藥典及相關(guān)文獻(xiàn)[3,4]中關(guān)于芍藥苷的含量測(cè)定方法，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了篩選，最終選用甲醇

8、-磷酸（25:75）系統(tǒng)，此系統(tǒng)能有效減小芍藥苷拖尾，使色譜峰峰型良好，保留時(shí)間適中。