清毒湯治療急性肝損傷大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的實(shí)驗(yàn)研究

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1、清毒湯治療急性肝損傷大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的實(shí)驗(yàn)研究高連印付修文譚勇杜宇瓊車念聰【摘要】目的探討清毒湯對大鼠肝損傷內(nèi)毒素血癥的作用機(jī)制。方法建立硫代乙酰胺(TAA)所致大鼠肝損傷內(nèi)毒素血癥模型，以清毒湯進(jìn)行干預(yù)，通過血液生化及病理檢查，觀察其對內(nèi)毒素血癥大鼠肝功能、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、內(nèi)毒素（ET）的影響。結(jié)果清毒湯能明顯降低TNF-α，ET的含量，減輕肝細(xì)胞壞死程度，與模型組比較差異有顯著性意義(P0.05或P0.01)。結(jié)論清毒湯能使ET含量、TNF-α水平降低是其對TAA所致大鼠肝損傷具有防護(hù)作用的機(jī)制之一?！娟P(guān)鍵詞】

2、清毒湯藥效學(xué)內(nèi)毒素血癥大鼠　　清毒湯是由《傷寒論》中的小承氣湯化裁而來。該方具有清熱燥濕解毒、活血涼血育陰的功效。經(jīng)臨床驗(yàn)證清毒湯治療慢性肝病腸源性內(nèi)毒素癥安全有效，用后可以迅速改善癥狀，抑制內(nèi)毒素（ET）的產(chǎn)生，提高機(jī)體清除ET的能力，是重癥肝病治療過程中重要的輔助治療藥物〔1〕。為了進(jìn)一步研究清毒湯的作用機(jī)制，我們采用硫代乙酰胺所致肝損傷模型進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)。1材料與儀器1.1動(dòng)物選用SD大鼠38只，體重200～220g，雌雄兼用，清潔級。由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號：SCXK（京）-2006-0003。1.2藥

3、物清毒湯，常規(guī)水煎制，生藥含量為1.1g/ml。1.3試劑硫代乙酰胺，由北京化學(xué)試劑公司提供，批號010629；戊巴比妥鈉，北京通縣育才精細(xì)化工廠生產(chǎn)，批號950427；鱟試劑盒，由上海伊化臨床醫(yī)學(xué)科技公司（上海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所）提供；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（AST）試劑盒，由Roche公司提供；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）放免試劑盒，由北京北方生物技術(shù)研究所提供。1.4儀器Reicheit-Jung2040切片機(jī)德國產(chǎn)；BH-2光學(xué)顯微鏡，Olympus，日本；Ql/100g體重給予灌胃，1h后腹腔注射硫代乙

4、酰胺（TAA）600mg/kg體重，分別于6，12h后再次灌胃給予清毒湯；模型組灌胃給予同容積的蒸餾水，1h后腹腔注射TAA，劑量同清毒湯組，分別于6，12h后再次灌胃給予相應(yīng)等量的蒸餾水；正常對照組灌胃相應(yīng)等量的蒸餾水和腹腔注射相應(yīng)等量的生理鹽水。注射24h后，將各組大鼠以45mg/kg體重的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，于腹主動(dòng)脈無菌取血，分離血清、血漿，分別用于ALT，AST，TNF-α以及內(nèi)毒素含量的測定。取肝臟，用10%福爾馬林固定。2.2指標(biāo)測定2.2.1肝臟損傷情況的病理形態(tài)學(xué)觀察取肝臟，常規(guī)取材，石蠟包埋，HE染色。光鏡下對

5、其進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察，并用Qwin圖像分析系統(tǒng)測定其損傷面積百分比。測定方法：在200×光鏡下，隨機(jī)選取10個(gè)視野，測定其損傷面積百分比，取其平均值。2.2.2血清中ALT，AST活性濃度測定用日立7170全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測定。2.2.3血清中TNF-α含量測定按照試劑盒所附說明書，用GC-911γ放射免疫計(jì)數(shù)器進(jìn)行測定。2.2.4血漿中內(nèi)毒素含量測定按照試劑盒所附說明書，用752C紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行測定。2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果以±s表示，采用方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)。3結(jié)果3.1病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果3.1.1正常對照組肝臟結(jié)構(gòu)正常，被膜

6、不增厚，小葉境界清晰，肝板以小葉中央靜脈為中心，呈放射狀排列。肝板為一個(gè)細(xì)胞厚度。肝竇未見擴(kuò)張，亦無狹窄。肝葉實(shí)質(zhì)細(xì)胞未見變性及壞死。中央靜脈壁無增厚，門管區(qū)三管清晰可見，無淋巴細(xì)胞浸潤，未見結(jié)締組織增生。間質(zhì)細(xì)胞不增多。見圖1。3.1.2模型組肝臟結(jié)構(gòu)基本正常，被膜不增厚，肝小葉境界尚清晰，肝板未見增厚。肝實(shí)質(zhì)可見多發(fā)灶狀水泡變性及氣球樣變，并可見新鮮的點(diǎn)狀、灶狀、帶狀及橋聯(lián)狀壞死。壞死灶可見細(xì)胞碎片，并見中性粒細(xì)胞、少量嗜酸性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤。浸潤之炎性細(xì)胞可見退變及核碎裂。壞死灶內(nèi)有處可見圓形嗜酸性小體。點(diǎn)、灶狀壞死多見于中

7、央靜脈旁小葉下靜脈周圍，嚴(yán)重處小葉中心帶呈帶狀壞死，壞死灶有時(shí)可與鄰近的中央帶或周邊帶相連，構(gòu)成橋連狀壞死。見圖2。3.1.3清毒湯組所見與模型組相似，但點(diǎn)灶狀壞死、中央帶狀壞死及橋連狀壞死均較模型組為輕。見圖3。圖3清毒湯組進(jìn)一步的圖像分析結(jié)果顯示，清毒湯組的肝臟損傷面積百分比明顯低于模型組。見表1。表1各組大鼠肝臟的損傷情況模型組比較，△P0.05,△△P0.013.2各組大鼠血清中ALT,AST活性濃度的影響結(jié)果見表2。表2各組大鼠血清中ALT,AST活性濃度的變化與正常對照組比較，*P0.05,**P0.01;與模型組比較，△

8、△P0.013.3各組大鼠血清中TNF-α含量的影響結(jié)果見表3。表3各組大鼠血清中TNF-α含量的變化（與模型組比較，△P0.05,△△P0.01；與模型組比較，△△P0.013.4各組大鼠血漿中內(nèi)毒素含量的影響見表4。