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1、天山巖黃芪根中多糖的提取及含量測定論文海力茜陶爾大洪,孫蓮,馬合木提買買提明,何燕【關鍵詞】天山巖黃芪根;,,多糖含量;,,分光光度法摘要:目的研究天山巖黃芪根中多糖的含量。方法采用分光光度法測定天山巖黃芪根中多糖的含量,以葡萄糖為對照品,以苯酚-濃硫酸為顯色劑,在486nm處測定樣品溶液的吸光度。結果標準曲線為A=51.654C+0.0372,r=0.9998.freelsemenoviiRegeletHerd.MethodsUsesmethodinspectrophotometrictodeterminethePolysac
2、charideintherootsofHedysarumsemenoviiRegeletHerd.Taketheglucoseastheparison,takethephenol-strongsulfuricacidasthedeveloper,λ=486nmdeterminationsamplesolutionattractstheluminosity.ResultsThestandardcurveethodissimple,sensitiveandaccurate.KeysemenoviiRegeletHerd;Polysa
3、ccharide;SX-spectrophotometry豆科巖黃芪屬植物,具有補氣固表、利尿托毒、排膿、斂瘡生肌之功能[1]。現代藥理研究證明其有強心、利尿、降壓、護肝、抗腎炎和提高免疫等作用。該屬植物化學成分較復雜,其中具有生物活性的成分有多糖、木質素類、黃酮類化合物、香豆苯醚類、生物堿類、皂苷類、甾體類、氨基酸、微量元素等眾多的生物活性物質[2~8]。天山巖黃芪HedysarumsemenoviiRegeletHerd為豆科(Leguminosea)巖黃芪屬(HedysarumLinn.)植物,分布于新疆烏魯木齊、伊犁、阿
4、勒泰、塔城等地區(qū),經過調研和文獻查新得知,對天山巖黃芪中多糖的提取及含量測定未見報道。因此,為了資源開發(fā),我們首次對天山巖黃芪中多糖的提取及含量測定進行研究。多糖不僅是機體的重要組成部分,還具有提高機體免疫、抗菌、抗病毒、抗衰老、抗腫瘤、抗突變、降血脂、降血糖、防輻射以及改善動物生產性能等多種生物活性,同時由于它自身對細胞毒性極小,對正常細胞影響很小,因此多糖作為藥物對于治療多種免疫缺損疾病和自身免疫疾病有顯著的效果。為此,我們采用可見分光光度法對天山巖黃芪根中多糖的含量進行了測定,為今后進一步地研究、開發(fā)該藥用植物資源提供參考
5、。1材料與試劑1.1樣品來源天山巖黃芪6月份采自新疆烏魯木齊東山區(qū),采后洗凈,晾干,60℃烘干,粉碎后過60目篩備用。1.2儀器與試劑SX721分光光度計(上海第三分析儀器廠),紫外分光光度儀,超聲儀(SK8210HP),水浴鍋,酒精計,漏斗,分液漏斗,無水葡萄糖,苯酚分析純,濃硫酸,95%乙醇,氯仿,正丁醇,活性碳。2方法與結果2.1多糖的提取與精制[9,10]天山巖黃芪根粉100g加水適量超聲提取3次,30min/次,過濾,合并濾液,濃縮,加95%醇至含醇量為80%,靜置過夜(4℃),過濾,分離出沉淀,加適量水溶解,加95%
6、醇至含醇量為80%,再靜置過夜(4℃),過濾,分離出沉淀,加水溶解,除蛋白(氯仿∶正丁醇=4∶1),共除20次,加活性炭脫色,抽濾,加95%醇至含醇量為80%,靜置過夜(4℃,過濾,分離出沉淀,冷凍干燥得多糖(0.5051g),密封備用。2.2溶液的制備2.2.1葡萄糖標準溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1g,置100mg容量瓶中,加蒸餾水至刻度,再精密吸取10ml于另一容量瓶中,再加蒸餾水至刻度,搖勻備用,得0.1mg/ml的葡萄糖標準溶液。2.2.2苯酚溶液的制備稱取苯酚100g,加鋅片0.1g,NaHCO3
7、0.05g,蒸餾,收集182℃餾分,稱取此餾分5g,加蒸餾水95ml,置棕色瓶中備用,得濃度為5%的苯酚溶液。2.2.3天山巖黃芪多糖液的制備精密稱取干燥至恒重的天山巖黃芪多糖0.1g,置100mg容量瓶中,加蒸餾水至刻度,再精密吸取10ml于另一容量瓶中,再加蒸餾水至刻度,搖勻備用,得0.1mg/ml的天山巖黃芪多糖溶液。2.3最大吸收波長的選擇分別配制0.1mg/ml的葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、醛糖溶液,分別精密吸取1ml于具塞試管中,分別加苯酚試液1ml,搖勻,迅速加濃硫酸5ml,振搖2min后,旋轉于沸水浴中加熱
8、15min,取出置冷水中冷卻置室溫,以苯酚-濃硫酸溶液為空白,用紫外分光光度儀在400~800nm范圍內,掃描光譜圖,得上述糖溶液的最大吸收分別為486,488,479,488,479nm。以同樣的方法處理天山巖黃芪多糖樣品溶液,在486nm處有最大吸收。2.4