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1、微波輔助提取黃芪多糖及含量測定論文龔蘇曉，高展，張鐵軍，楊俊紅，邸倩倩【摘要】目的以微波從黃芪中提取多糖，并測定其含量。方法運用微波技術(shù)提取黃芪多糖，采用正交設(shè)計法優(yōu)選苯酚-濃硫酸法顯色條件，并測定其多糖含量。結(jié)果苯酚-濃硫酸法的最佳顯色條件為5%苯酚溶液的用量為1ml.freell，水浴溫度為100℃，水浴時間為15min；微波輔助提取黃芪多糖的最佳功率和時間為900ethodsThepolysaccharidesfromRadixAstragali.icroiningthecontentofp
2、olysaccharidesfromRadixAstragaliizedbyphenol-sulfuricacidmethod.ResultsTheoptimuml5%phenolsolutionltestingsolutionandmixed.Then5.0mlconcerntratedsulfuricacidbiencefor5min,.freelin,folloicroin.ConclusionThepolysaccharidescanbeobtainedfromRadixAstragali
3、bymicroethod;Microembranaceus(Fisch.)Bge．var．mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch)Bge．的干燥根，是重要的益氣中藥，其性甘、溫，入肺、脾經(jīng)，具有補氣固表、利尿托毒、排膿、斂瘡生肌的功效［1］。黃芪的化學(xué)成分主要為多糖類、皂苷類、黃酮類及氨基酸類，另外還含有單糖、低聚糖、黏液質(zhì)、苦味素、膽堿、甜菜堿、葉酸等成分［2］。黃芪多糖是黃芪補氣的主要活性物質(zhì)，大量體內(nèi)外實驗及臨床研究表明
4、，黃芪多糖具有增強機體免疫功能、強心、降壓、降血糖、抗應(yīng)激、抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、抗氧化等多種藥理功效［3］。近年來微波技術(shù)在天然產(chǎn)物成分提取領(lǐng)域得到了很大的發(fā)展和應(yīng)用，主要是利用微波的熱效應(yīng)。微波加熱具有穿透力強、選擇性高、加熱效率高、耗能少、成本低、操作簡便等特點。微波輔助提取法提取產(chǎn)物的副產(chǎn)品少，易分離提取，且微波加熱易使植物細(xì)胞壁破裂而有效提高提取率。目前黃芪多糖的微波輔助提取的有關(guān)報道較少，本文采用微波輔助水提醇析法提取黃芪多糖并用苯酚-濃硫酸法測定多糖含量，為以后黃芪多糖微波提取法的
5、開發(fā)利用提供依據(jù)。1儀器與材料UV-1601型可見紫外分光光度計（日本島津）。AB-104型電子分析天平（梅特勒-托利多上海儀器有限公司生產(chǎn)）。冷凍干燥機（Edl，加入2.5倍量95%乙醇，低溫靜置過夜，離心，沉淀用150ml蒸餾水溶解后，加入等體積5%三氯乙酸-正丁醇液反復(fù)3次除蛋白，離心，上清液用2mol/LNaOH調(diào)pH=7.0，離心，上清液加入2.5倍量95%乙醇4℃靜置48h，離心，沉淀用75ml蒸餾水溶解，離心，上清液用中空纖維膜超濾，截留分子量6000以上的藥液，濃縮，冷凍干燥得黃芪
6、多糖純品。2.2黃芪多糖的含量測定方法2.2.1精制黃芪多糖供試液的制備精密稱定60℃干燥至恒重的黃芪多糖10mg，加少量蒸餾水，微熱使其全部溶解后，定容至250ml量瓶中。2.2.25%苯酚試劑的配制取苯酚100g，加鋁片0.1g和碳酸氫鈉0.05g，蒸餾，收集182℃餾分，稱取此餾分5g，加水定容至100ml，置棕色瓶中存冰箱備用。2.2.3苯酚-濃硫酸法最大吸收波長的確定精密吸取2ml精制黃芪多糖供試液，另精密吸取蒸餾水2ml作空白對照，分別加入5%苯酚溶液1ml，混合均勻后快速加入濃硫酸5
7、.0ml，即刻搖勻，室溫靜置5min，沸水浴加熱20min，取出，流水冷至室溫，用紫外可見分光光度計在190～900nm范圍內(nèi)掃描，確定最大吸收波長為490nm。2.2.4顯色方法的優(yōu)選設(shè)計5%苯酚溶液的用量（A）、濃硫酸的用量（B）、水浴的溫度（C）、水浴的時間（D）4個因素，每個因素取3個水平，選用L9（34）正交表進(jìn)行實驗。每組實驗均精密量取精制黃芪多糖供試液2.0ml，按正交表中方案顯色，測定490nm波長處的吸收度，以吸收值為評價指標(biāo)，另同時測定2h內(nèi)吸收值的穩(wěn)定性（每間隔30min測1
8、次），計算吸收值的RSD。見表1～2。表1因素水平（略）表2L9（34）正交實驗結(jié)果（略）由表2可見，以吸收度為主要考察指標(biāo)，極差R值大小顯示各因素作用主次為DCAB，直觀分析其最佳顯色條件組合為A1B2C1D1。經(jīng)過方差分析，以吸收度為主要考察指標(biāo)，A，B，C，D因素對吸收值大小的影響均無顯著意義。綜合直觀分析和方差分析結(jié)果，同時考慮操作的簡便和條件的易控性，最終確定最佳顯色條件為待測溶液2ml，加入5%苯酚溶液1ml，混勻，迅速滴加濃硫酸5ml，搖勻，室溫放置5min，沸水浴加
