黃芪湯中多糖的提取以及含量測定研究

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1、黃芪湯中多糖的提取以及含量測定研究ok3L藥液),加入95%乙醇,使含醇量為70%,低溫靜置12h以上,以4000r/min,離心10min,棄去上清液,取沉淀用水溶解,再離心一次,取上清液濃縮至1:08,加入95%乙醇,使含醇量為80%,低溫靜置12h以上,抽濾,沉淀依次用無水乙醇、丙酮洗滌,抽干,在恒溫干燥箱50℃干燥,得多糖提取物[2]。2.1.2加水量的考察:稱取黃芪湯藥材14g共3份,第一份加8倍量水煎煮2次,每次25h,第二份加l2倍量水煎煮3次,每次1.5h,第三份加25倍量水煎煮2次,

2、每次2h,分別用4層紗布過濾,合并濾液,其余按“2.5”項下的操作,加水量為藥材量12倍時,多糖提取率達9.7%.是較高的。2.1.3藥液相對濃度的考察:稱取黃芪湯藥材42g(、.黃芪15g.白術(shù)9g、甘草6g),加12倍量的水煎煮3次,每次1.5h后,過濾濃縮,濾液平均分成三份,分別濃縮為1:0.8、1:1、1:1.2,分別加入95%乙醇,使含醇量為70%,其余按“2.5”項下的操作。結(jié)果多糖含量分別為12.2%、8.6%、4.3%,從實驗結(jié)果可知,當(dāng)藥液相對濃度為1:0.8時,多糖提取率較高。2.

3、2多糖的含量測定研究2.21供試品溶液的制備:精密稱取多糖提取物0.lg,置100mL容量瓶中,加蒸餾水溶解并稀釋至刻度,搖勻,配制成0.1mg/mL溶液,精密移取2.5mL稀釋液,置50mL容量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,振蕩搖勻,備用[5

4、。2.2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品100.6mg,置100mL容量瓶中,加蒸餾水溶解并稀釋至刻度,搖勻。再精密吸取溶液10mL,置于100mL容量瓶中,加蒸餾水稀釋至刻度,搖勻,制成濃度為0.1006mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。2

5、.2.3最大吸收波長的選擇:精密移取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液各1.0mL,分別置10mL具塞試管中,加蒸餾水使成2.0mL,精密加入1.0mL苯酚溶液,搖勻,迅速加入5.0ml濃硫酸,靜置5min后,置沸水浴中反應(yīng)15min后取出并放至室溫,于400-600mm范圍內(nèi)掃描。測得兩者的最大吸收波長均為為490mm。2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:分[1][2]下一頁ok3L,置25mL具塞試管中[第一論文網(wǎng)專業(yè)提供代寫論文和論文代寫服務(wù),加蒸餾水使成2.0mL,精密加入1.0mL苯酚溶液,搖勻,迅速加入5.

6、0mL濃硫酸,靜置5min后,置沸水浴中反應(yīng)15min后取出并放至室溫,于490mm處測定吸光度(A)。以吸光度A對濃度C進行線性回歸,計算回歸方程A=60.047C-0.0006.r=0.9997。濃度C在0.0012一0.0013mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.2.5精密度試驗:精密移取對照品溶液1.0mL,按“2.2.4”項下操作,測定吸光度,連續(xù)測定6次,吸光度的RSD為0.08%,表明儀器精密度良好。2.2.6穩(wěn)定性試驗:精密移取供試液1.0mL按“2.2.4”項方法操作,測定吸光度。每隔

7、30min測定一次,連續(xù)2.5h考察其穩(wěn)定性,吸光度的RSD為1.6%,結(jié)果表明樣品溶液在2.5h內(nèi)顯色穩(wěn)定。2.2.7重復(fù)性試驗:稱取黃芪湯劑的藥材共14g,按“2.1.1”項下方法操作,得多糖提取物1.8829g,精密稱取多糖提取物0.1g,共6份,按“2.2.1”項下操作配制供試品溶液,分別精密移取供試品溶液1.0mL,按“2.2.4”項下方法測定,并計算多糖提取物中多糖相對含量,平均為92.7%,再換算成黃芪湯劑中多糖的含量,平均為12.4%,RSD為2.6%,結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。2.2

8、.8加樣回收試驗:精密稱取同一多糖提取物0.05g,共6份,分別精密加入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品適量,其余按“2.2.7”項下操作,計算多糖回收率,結(jié)果見表。表1回收率試驗測定結(jié)果2.2.9祥品含量測定稱取黃芪湯劑的藥材14g,共6份,按“2.1.1”項下方法操作,得多糖提取物,精密稱取多糖提取物0.1g,按“2.2.1”項下操作配制供試品溶液,分別精密移取供試品溶液1.0mL,按“2.2.4”項下方法測定,求得多糖的含量,實驗結(jié)果見表2:表2黃芪湯的多糖含量測定結(jié)果3討論黃芪多糖屬于極性大分子化合物,主要由D-

9、葡萄糖、D-半乳糖和L-阿拉伯糖組成。研究發(fā)現(xiàn),多糖的生物活性與分子量、溶解度、粘度、一級結(jié)構(gòu)和高級結(jié)構(gòu)有關(guān),因此多糖提取時應(yīng)根據(jù)其有效成份的不同來設(shè)計工[第一論文網(wǎng)專業(yè)提供代寫論文和論文代寫服務(wù),藝路線。試驗中同時比較測定了黃芪、白術(shù)、甘草各單味藥材中多糖的含量,結(jié)果顯示黃芪湯中多糖的平均含量為13.1%,全方湯劑的多糖含量略高于黃芪、白術(shù)、甘草單藥湯劑的多糖含量之和。有關(guān)文獻報道[5]用不同濃度的湯劑進行醇沉?xí)r,濃度太高或太低都會實驗結(jié)果,本實驗孝察